control de calidad


Control de calidad de las técnicas de Gram
El control de calidad en el laboratorio tiene como objetivo , que elproducto final del trabajo tenga un grado aceptable de seguridad , deconformidad con los limites establecidos. Debido a que la mayoría delos resultados en microbiología son producto de interpretaciones yevaluación de reacciones bioquímicas de seres vivos, donde lacapacidad yexperiencia del evaluador tienen un gran valor, loscálculos de coeficientes de variación y desviaciones estándares queson parte de funciones analíticas, tienen poca aplicación en ellaboratorio de microbiología. Es por ello que algunos expertosconsideran que el control de calidad en microbiología es mas un arteque una ciencia.Un programa de control de calidad debe contar con los siguienteselementosmínimos:
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Las pruebas y los procedimientos.
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Verificación y validación del test.
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Manual de procedimientos.
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Mantenimiento de reportes y libros de registros.
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Evaluación del personal.
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Controles externos.
La
tinción de Gram
o
coloración Gram
es un tipo detinción diferencial empleado enmicrobiologíapara la visualización debacterias, sobre todo enmuestras clínicas. Debe su nombrealbacteriólogo danés Christian Gram,que desarrolló la técnica en1884. Se utiliza tanto para poder referirse a lamorfología celular bacteriana como para poder realizar una primeraaproximación a la diferenciación bacteriana, considerándoseBacteria Gram positivaa las bacterias que se visualizan de color violeta yBacteria Gram negativaa las que se visualizan de color rosa.
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Recoger muestras.
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Hacerel extendido en espiral.
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Dejar secar a temperatura ambiente.
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Fijar la muestra con metanol durante un minuto o al calor(flameado 3 veces aprox.)
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Agregar azul violeta (cristal violetao violeta de genciana) yesperar 1 min. Todas las células gram positivas y gramnegativas se tiñen de color azul-purpura.
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Enjuagar con agua.
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Agregarlugoly esperar entre 30 segundos y 3 minutos.
•Enjuagar con agua.
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Agregaracetonay/oalcoholy esperar entre 15 y 20s.
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Enjuagar con agua.
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Tinción de contraste agregandosafraninaofucsinabásica yesperar 1-2 min Este tinte dejará de color rosado-rojizo lasbacterias Gram negativas
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Enjuagar con agua.
Explicación
El cristal violeta (colorante catiónico) penetra en todas las célulasbacterianas (tanto Gram positivas como Gramnegativas). El lugolestá formado por I
2
(yodo) en equilibrio con KI (yoduro de potasio), elcual está presente para solubilizar el yodo. El I
2
entra en las células yforma un complejo insoluble en solución acuosa con el cristal violeta.La mezcla de alcohol-acetona que se agrega, sirve para realizar ladecoloración, ya que en la misma es soluble el complejo I
2
/cristalvioleta. Los organismos Grampositivos no se decoloran, mientras quelos Gram negativos sí lo hacen.Para poner de manifiesto las células Gram negativas se utiliza unacoloración de contraste. Habitualmente es un colorante de color rojo,como la safranina o lafucsina. Después de la coloración de contrastelas células Gram negativas son rojas, mientras que las Gram positivaspermanecen azules.La safranina puede o no utilizarse, no escrucial para la técnica. Sirvepara hacer una tinción de contraste que pone de manifiesto lasbacterias Gram negativas. Al término del protocolo, las Grampositivas se verán azul-violáceas y las Gram negativas, se verán rosas(si no se hizo la tinción de contraste) o rojas (si se usó, por ejemplo,safranina).Esta importante coloración diferencial fue descubierta por HansChristian Gram en 1884. En estemétodo de tinción, la extensiónbacteriana se cubre con solución de uno de los colorantes de violetade metilo, que se deja actuar durante un lapso determinado. Seescurre luego el exceso de violeta de metilo y se añade luego unasolución de yodo, que se deja durante el mismo tiempo que laanterior; después se lava el portaobjetos con alcohol hasta que ésteno arrastre más colorante. Sigue a tal...