Coombs indirecto. PRACTICA.

COOMBS INDIRECTO
OBJETIVO:
Aprender a realizar de modo correcto para llevar a cabo la prueba de Coombs indirecto, utilizada para las pruebas de compatibilidad.
FUNDAMENTO:
Esta prueba es tambiénconocida como prueba de anti globulina indirecta y su principio es determinar la sensibilización de los hematíes in vivo por anticuerpos no aglutinantes (Ig G) y las fracciones del complemento,especialmente C3D.
El agregado de suero Anti-Humano (poli específico) a glóbulos rojos cubiertos de inmunoglobulinas y/o fragmentos del complemento produce una aglutinación visible macroscópicamente.INVESTIGACION TEORICA:
Las experiencias descritas por Coombs, Mourant y Race en 1945 establecieron que las pruebas de anti globulina Humana resultaban los mejores métodos para detectar anticuerpossensibilizantes pero no directamente aglutinantes. Originalmente se hacía referencia a antígenos del sistema Rh pero experiencias posteriores probaron el valor de estas pruebas en la detección deanticuerpos en casi todos los grupos sanguíneos de importancia clínica, siendo empleadas en los siguientes casos:
Prueba de Anti globulina indirecta:
-Screening de suero de donantes y pacientes paraanticuerpos irregulares.
-Pruebas de compatibilidad previas a transfusión.
-Fenotipo de glóbulos rojos
-Identificación y titulación de anticuerpos encontrados en sueros o eluatos.
MATERIAL:
• Centrifuga• Tubos de hemolisis
• Suero anti humano poli específico (reactivo de Coombs)
• Solución salina o fisiológica.
• PBS (Buffer fosfato pH 7,0 +- 0,2
• Baños de agua a 37°C
PROCEDIMIENTO:
1. En untubo de hemolisis, colocar dos gotas del suero a probar.
2. Agregar 1 gota de suspensión de glóbulos rojos a probar al 3%, lavado tres veces y resuspendidos en PBS
3. Mezclar e incubar a 37°centígrados durante 30 -60 min.
4. Lavar los glóbulos con PBS. Asegurarse de remover la mayor cantidad de solución salina al final de cada lavado, a manera de obtener un botón celular “seco”. Descartar...