Correlacion De Polimorfismos Genotipicos M1 Con Los Fenotipos De Inductibilidad De La Enzima P450 En Una Población Normal De Misiones

UNIVERSIDAD NACIONAL DEL NORDESTE
Comunicaciones Científicas y Tecnológicas 2000

Correlación del polimorfismo genotípico m1 (Msp1) con los fenotipos de
inductibilidad de la enzima P1450 en una población normal de Misiones
Gómez Demaio, Hugo1 - Martín, Cristina1 - Brandan,Nora2
Carlucci, M.3 - Bluvstein, Samuel2
1.
2.
3.

Lab. de Investigaciones del C’IETEMM - Hosp. Prov. de Pediatría.Mariano Moreno s/n. - (3300) Posadas - Misiones.
Facultad de Medicina - UNNE.
Hospital Ramón Madariaga - Posadas - Misiones - E-mail: demaio@infovia.com.ar

ANTECEDENTES

La exposición a hidrocarburos aromáticos policíclicos (HAPs)- componentes o vehículos de la mayoría de los
agroquímicos usados en nuestra región- produce en los tejidos de los mamíferos, la inducción de la enzima
arylhidrocarburo hidroxilasa (AHH)- Citocromo P1450 - para su detoxificación . La AHH está codificada
por el gen ambiental CYP1A1. La cantidad de enzima sintetizada en este proceso es una característica
fenotípica (expresión del gen) variable de un individuo a otro y se hereda siguiendo las leyes de Mendel. En
linfocitos humanos se describen tres fenotipos de respuesta, según la cantidad de enzimaproducida para la
detoxificación de un HAP: de baja, intermedia y alta respuesta. Al grupo de respuesta alta pertenece sólo el
10% de la población caucásica, y estos, frente a la exposición con un HAP, tienen un riesgo mayor de
presentar mutagénesis, carcinogénesis , teratogénesis ( errores del desarrollo embrionario de línea media,
como es por ejemplo, el mielomeningocele) o enfermedades portoxicidad.
En trabajos anteriores publicamos las frecuencias halladas de los fenotipos mencionados utilizando como
metodología, la incorporación de Uridina tritiada al ARN mensajero del gen activado. En una población de
recién nacidos normales del Servicio de Neonatología del Hospital Madariaga de Posadas (Misiones) (n=60),
hallamos 45% de baja inducción; 46% de inducción intermedia y 12% deinducción alta, valores similares a
los de población caucásica, evaluados por otros autores con otra metodología (p: 0,52). En los pacientes con
MMC (n=60), hallamos : 60% y 40%, en los de intermedia y alta inducción, respectivamente y ninguno en el
grupo de baja respuesta, diferentes significativamente de sus controles normales.(p: 0,0001).
La diferencia para detoxificar los HAPs halladas enlos pacientes con MMC, hicieron necesario el estudio del
gen CYP1A1 cuyos polimorfismos ( distintas variantes según mutaciones en el mismo) se correlacionarían
con los fenotipos descriptos. La determinación de las frecuencias de los grupos susceptibles en poblaciones
normales expuestas a contaminantes ambientales, permitiría la identificación de los individuos en riesgo de
presentar mutaciones yse podría establecer la relación entre carga genética y agresión ambiental, en la
etiopatogenia del MMC y otros defectos del desarrollo embrionario de línea media, así como el desarrollo de
un modelo animal en ratas con genotipo susceptible.
MATERIALES Y METODOS

Se extrae el ADN a partir de 300 µl de sangre de cordón umbilical de 60 recién nacidos normales, tomadas
como control, delServicio de Neonatología del Hospital Madariaga de Posadas, Misiones. Se amplifica el
extremo 3' del gen CYP1A1, con la técnica de la Reacción en Cadena de la Polimerasa usando los primers
C47: 5’ CAGTGAAGAGGTGTAGCCGCT 3’ y C44: 5’ TAGGAGTCTTGTCTCATGCCT 3’ , en las
siguientes condiciones: una denaturación inicial a 95º C por 5’; luego 25 ciclos con una hibridización a 68º
por 1’; extensión a 72ºCpor 1’ y denaturación a 95ºC por 1’. Al cabo del final de los ciclos, una extensión a
72º por 3’. Los fragmentos amplificados se digieren luego con MspI ( New England Biolabs) según
recomendaciones del producto, a 37ºC por 2 horas.Los productos son sujetos a electroforesis en un gel de
agarosa al 1,8% y se visualizan con tinción con Bromuro de Etidio. El marcador de peso molecular utilizado
es...