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TECNICA ENTERRADA DE ROSSI CHOLIDNI

I.- MARCO TEORICO

Se conoce como la tecnica /metodo del portaobjetos enterrado o portaobjetos de contacto de Rossi y Cholidny. Fue el primero en utilizarse en estudios de las caracteristicas de la población microbiana del suelo en relación con su medio ambiente ; este método no escuantitativo si no cualitativo , se utiliza para estudios de laboratorio ycampo

Las limitaciones del método es la incapacidad de aislar y cultivar las células microbianas observables a traves del microscopio

II.- OBJETIVOS

Realizar el estudio poblacional microbiológico del suelo a traves de la técnica de la lámina enterrada de Rossi y Cholidni

III.- MATERIALES

• Tierra de campo finamente cernida
• 04 vasos de vidrio
• 08 Láminasportaobjetos limpias
• 04 Gramos de harina de sangre y almidón
• Pabilo
• 04 Microscopios de inmersióm
• 01 Gradilla para colorear
• 01 Mechero
• 01 Pipeta Pasteur
• 01 Beaker
• 01 Cocina electrica
• 01 Frasco con colorante eritrosina Carbolica (eritrosina 1g, Fenol acuoso al 5 % , 100 ml . ClCa 0.05g)
• 01 Balanza

IV.- PROCEDIMIENTO

1. A cuatrorecipientes conteniendo aproximadamente 200 g de suelo cada uno añadir lo sgte:

a) Ningun tratamiento
b) 1g de almidon
c) 1g de harina de sangre o material similar
d) 1g de almidon y 0.1 g de harina de sangre o similar

2. Mezclar las sustancias anteriores dentro del suelo (tierra)completamente y ajustar cada muestra una capacidad de tendencia dehumedad de 40 – 50%
3. Insertar 2 láminas limpias unidas, dentro de cadad recipiente de suelo, llevar el suelo contra las láminas y cubrir los recipientes con tapa de papel para prevenir una excesiva evaporación. Incubar los recipientes con suelo a temperatura de la habitación por una semana

4. Extraer una lámina de cada recipiente con una ligera agitación corriente de agua y sumergiendolasuavemente dentro de un recipiente de agua . Dejar secar la lámina al aire y proceder a la fijación con cuidado sobre una llama débil

5. Colocar la lámina sobre un baño calinete y anadir un exceso de colorante y calentar por 5 a 6 minutos . No dejar que el colorante se seque . Lavar las láminas cuidadosamente para remover las particulas del suelo . secar al aire y examinar bajo inmersion.RESULTADOS

ESTUDIO EN CAMPO

• Se coloca de 4 a 6 portaobjetos en el campo, introduciendolos en la región más cercana a las racices, durante un periodo de 15 a 30 días pasado este tiempo se remueven con cuidado de no destruir el frotis formado sobre el portaobjetos.

• Lavar ligeramente el frotis con agua para eliminar las particulas gruesas del suelo, dejar secar al aire libre• Colorear con rosa de bengala , azul de lactofenol o hacer una coloración gram

• Observar al microscopio

Cocos gran negativos Bacilos gran positivos

CUESTIONARIO

1. ¿Qué se entiende por biomasa microbiana?

Cantidad de materia viva producida en un área determinada de la superficie terrestre, o por organismos de untipo especifico. El término es utilizado con mayor frecuencia en las discusiones relativas a la energía de biomasa, es decir el combustible energético que se obtiene de recursos biológicos

Biomasa microbiana es una fracción orgánica relativamente lábil controlada por factores ambientales y otros relacionados con la producción y manejo

2. Quimiorganotrofos

Utilizan carbonoorgánico tanto como clonador de electrones como fuente de carbono ejm: hongos

Quimilitotrofos

El clonador de electrones es una molécula inorgánica , son por lo general respiradores aerobios, o sea el aceptor final de electrones es el oxigeno molecular , son varios tipos según la clase clonante inorgánico de electrones que oxidan.

✓ Bacterias oxidadoras de hidrogeno...