CPS de concentración por centrifugación/sedimentación

CPS de concentración por centrifugación/sedimentación

Objetivo
Aprender a realizar la técnica por sedimentación de Ritchie, para la búsqueda de quistes y huevos que puedan quedar sedimentados.Introducción
Ritchie (1948) añade formol para fijar y preservar los elementos parasitarios, y éter para separar grasas y aceites. Se suspende la muestra en suficiente solución salina fisiológica paradar 10 o 12 ml de suspensión, la cual se filtra a través de 2 capas de grasa en un tubo de centrífuga. La suspensión se centrifuga, el sobrenadante se decanta y el sedimento se vuelve a suspendercuantas veces sea necesario, hasta que quede claro el sobrenadante. Después de una decantación adicional se mezcla el sedimento con 5 ml de formol al 10% y se deja reposar 5 minutos, después de cual seañaden 3 ml de éter y se agita vigorosamente. Se centrifuga de nuevo a 1500 rpm aproximadamente durante 2 minutos y se decanta todo el sobrenadante. Se extiende un delgado frotis del sedimento en eportaobjeto, se le mezcla una gota de solución de yodo y se monta la preparación con cubreobjetos para examinarlas. Este método produce un buen concentrado de quistes de protozoarios y huevos dehelmintos.
Materiales
Cono de papel desechable
Gasas
Vaso desechable
Abatelenguas
2 tubos de ensaye de 13 x 100
1 Gradilla
2 Pipetas graduadas de 5 ml
Portaobjetos
Cubreobjetos
Aplicadores demadera
Centrifuga
Tapón de hule
Reactivos
Solución salina 0.85%
Formol al 10%
Éter
Lugol

Procedimiento
1. Colocar de 1 a 2 g de heces (tamaño de una nuez) en 10 ml de solución salina 0.85%.2. Filtrar con doble gasa y recibir el filtrado en un tubo de ensaye de 13 x 100.
3. Centrifugar el filtrado a 2500 rpm por 3 minutos y decantar el sobrenadante.
4. El sedimento se suspende consolución salina 0.85% y se rompe el sedimento.
5. Se recontituye el sedimento con nueva solución salina y se vuelve a centrifugar.
6. Se repite el paso 4 y 5 2 o 3 veces más hasta que el ultimo...