creatinina

DETERMINACION DE CREATININA EN SUERO Y EN ORINA
Método: Colorimétrico - cinético; reacción de Jaffé.

Principio del método:
La creatinina de reacciona con el picrato alcalino formando un complejorojizo. El intervalo de tiempo escogido para las lecturas permite eliminar gran parte de las interferencias conocidas en el método. La intensidad del color formado es directamente proporcional a laconcentración de creatinina en la muestra ensayada.
Reacción:
Creatinina + ácido pícrico Complejo de ácido pícrico-creatinina
Procedimiento
DETERMINACIÓN DE CREATININA ENSUERO Método: Colorimétrico-cinético Jaffé

Tomar una muestra de sangre en tubo rojo y separar el suero

Con una alícuota de orina recolectada de 24 horas realizar una dilución 1/50 con aguadestilada

Ajustar la longitud de onda del espectrofotómetro a 492 nm (490 – 510 nm)

Levar el espectrofotómetro a cero de absorbancia usando un blanco de reactivo.

Para muestra de orina y sangre procederpipeteando lo siguiente en 4 tubos diferentes; la muestra se pipetea con el cronómetro en mano y cuando se estamos a punto de leer ya que requiere leerse a tiempos exactos:

Blanco
Patrón
Muestrasuero
Muestra orina
RT (NOTA 1, 2) (ml)
1.0
1.0
1.0
1.0
Patrón (µl
-
100
-
-
Muestra (µl)
-
-
100
100


Poner en marcha el cronómetro y leer la absorbancia de las muestras a los 30 segundos y a los 90segundos de que se mezclaron con los reactivos.

Calcular la diferencia de las absorbancias y realizar los cálculos para determinar las concentraciones de creatinina.

Cálculos:Valores de referencia

suero

orina

Hombres
0.7-1.4 mg/dL
61.8-123.7 µmol/L
10-20 mg/Kg/24h
88-177 µmol/Kg/24h
Mujeres
0.6-1.1 mg/dL
53.0-97.2 µmol/L
8-18 mg/Kg/24h
71-177 µmol/Kg/24hLinealidad del método: Desde el límite de detección de 0,09 mg/dL hasta el límite de linealidad de 15 mg/dL.
Si la concentración es superior al límite de linealidad, diluir la muestra ½ con NaCl 9 g/L y...