Crecimiento y cuantificacion

Crecimiento y cuantificación

9.3 El hospedador del virus

Dado que los virus solo se replican en el interior de células vivas, su investigación requiere el uso de hospedadores apropiados. De los tres tipos de hospedador, bacterias.
Para el estudio de los virus bacterianos, se utiliza cultivos puros en medios líquidos o semisólidos (agar). Puesto que existen muchas bacterias fáciles decultivar, resulta bastante fácil estudiar los virus bacterianos, y por esta razón se posee un conocimiento tan detallado de la multiplicación de los virus bacterianos.
Cultivos celulares
Un cultivo celular se obtiene induciendo el crecimiento de células de un órgano del animal de experimentación. Las células se obtienen generalmente por separación quirúrgica aséptica de porciones del tejido encuestión, disociación de las mismas mediante tratamiento con una enzima que rompe el cemento intercelular, y extensión de la suspensión resultante en el fondo de una superficie plana, tal como una botella o una placa de Petri.
Tampón bicarbonato. Para obtener un mejor crecimiento generalmente es necesaria la adición de una pequeña cantidad de suero sanguíneo, y también suelen añadirse variosantibióticos para prevenir la contaminación de bacteriana. También se añade un indicador de PH coloreando para ayudar a detectar esta contaminación.
Algunos cultivos preparados de esta manera crecen indefinidamente y pueden constituir líneas celulares permanentes. Tales cultivos celulares son los más convenientes para la investigación vírica ya que suministran continuamente material para estos fines. Enotros casos no ocurre.

Ensayo en placa
Cuando un virion inicia una infección en una capa o césped de células hospedadoras crecimiento en una superficie plana, puede ocurrir una zona de lisis o una zona de inhibición de crecimiento que se traduce en la aparición de un área clara en el césped. Esta zona clara se llama placa o calva, y se asume que cada placa se ha originado a partir de lareplicación de un único virión.
Las placas son esencialmente agujeros en un césped producido por un crecimiento celular confluente. Con virus bacterianos, pueden obtenerse placas cuando las partículas víricas se mezclan con la bacteria hospedadora y se extiende como una fina capa de agar blando que cubre la superficie de un medio de agar. Durante la incubación del cultivo, la bacteria crese y formauna capa túrbida que es invisible a simple vista. Sin embargo, allí donde se haya iniciado una infección, se produce lisis de las células, lo que resulta en la formación de una zona clara llamada placa o calva.
El ensayo en placa puede utilizarse para virus animales usando cultivos de células animales como sistema hospedador. Se prepara un cultivo en mono capa en una placa de Petri o botella planay se extiende sobre ella la suspensión vírica. Las placas se visualizan como zonas de destrucción de las células animales.
En algunos casos, el virus puede no destruir las células y no causar cambios en su morfología o velocidad de crecimiento que pueden ser reconocidos. Por ejemplo, los virus tumorales pueden no lisar las células pero las hacen crecer más rápidamente que las células noinfectadas, un fenómeno llamado transformación.

Eficiencia del cultivo en placa
Un importante concepto en virología cuantitativa es el de la eficacia del cultivo en placa. El número de partículas determinado en el ensayo en la placa siempre es menor que el determinado por microscopia electrónica. La eficiencia con la que los virones infectan las células rara vez es del 100% y, a menudo, esconsiderablemente menor. Eso no significa que los virus que no han infectado sean inactivos, aunque a veces este puede hacer el caso.
Infección productiva con estas partículas. Aunque con los virus de bacterias la eficiencia del cultivo en placa es frecuentemente más alta del 50%, con muchos virus de animales pueden ser muy baja, 0,1 y 1% no se sabe muy bien porque las partículas víricas varían en...