Criopreservacion

CRIOPRESERVACION

Como el cultivo celular se desarrolla dentro de un laboratorio de una serie de
líneas celulares serán desarrolladas o adquiridas, a menos que el trabajo
es exclusivamente con cultivos primarios. El uso de cada célula
línea se añade a su procedencia, y se convierte en cada uno de ellos un
recurso valioso. Si el único, la línea celular podría ser imposible
para reemplazar,en el mejor reemplazo sería caro y poco
tiempo. Es, por tanto, esencial para proteger a este
una inversión considerable por las líneas de células preservar.
20.1 JUSTIFICACIÓN DE LA CONGELACIÓN
Las líneas celulares en cultivo continuo son propensos a variación debida a
selección en la cultura de principios de paso (ver sección 3.8), la senescencia
en líneas celulares finitos (véanse lassecciones 3.8.1, 18.4.1), y genéticos y
inestabilidad fenotípica (véase la sección 16.1,18.3) en continua
líneas celulares. Además, incluso el mejor laboratorio de gestión es propenso a
fallo del equipo y la contaminación. La contaminación cruzada
y la identificación errónea (véanse las secciones 7.10.1, 16.1, 16.3, 16.6.2,
19.5; Cuadro 13.2) también se sigue produciendo con una alarmante
defrecuencia. Hay muchas razones, por lo tanto, para la congelación
que se establece un stock validado de las células; estas razones se puede
resumirse como sigue:
(1) la deriva genotípica debido a la inestabilidad genética
(2) La senescencia y la extinción resultante de la línea celular
(3) La transformación de las características de crecimiento y adquisición de
de propiedades asociadasmalignidad-
(4) inestabilidad del fenotipo debido a la selección y la desdiferenciación
(5) La contaminación por microorganismos
(6) La contaminación cruzada de otras líneas celulares
(7) Identificación errónea debido a un manejo descuidado
(8) Incubadora de fracaso
(9) Ahorro de tiempo y materiales de mantenimiento de líneas no
su uso inmediato
(10) Necesidad de distribución a otros usuarios20.2 ADQUISICIÓN DE LÍNEAS CELULARES
Para la criopreservación
Hay ciertos requisitos que deben cumplirse antes de la célula
líneas se consideran para la criopreservación (Tabla 20.1).
Validación. Las líneas celulares se debe a pruebas de
contaminación (véase la sección 19.3) y auténtico (véase la sección
16.3) antes de la criopreservación. Aunque una pocas ampollas
de una línea celular reciénadquirido puede ser congelada antes de completar
validación se ha llevado a cabo (véase la sección 20.4), adecuada
validación deben llevarse a cabo antes de las principales poblaciones son
congelado (ver Sección 7.10).
Cuando se congele. Si se trata de una línea celular finito, que se cultiva
a cerca de la duplicación de la población quinto con el fin de crear
un número suficiente de célulaspara la congelación. celular continua
líneas deben ser clonado (véanse las secciones 14.1, 14.3, 14.4), un
clon caracteriza seleccionados y reservas suficientes para el crecimiento
congelación. Las líneas continuas de células tienen ventajas, sino que sobreviven
indefinidamente, crecen más rápidamente, y puede ser clonado más
fácilmente, pero pueden ser menos estables genéticamente. Finitode células
líneas suelen ser diploides o cerca de ella y son estables entre ciertos niveles de aprobación, pero son más difíciles de clonar, crecer
más lentamente, y, finalmente, morir o transformarse.
20.3 Principios de la criopreservación
20.3.1 Antecedentes teóricos de congelación de la célula
Óptima de congelación de células viables para la recuperación máxima
la descongelacióndepende de minimizar cristales de hielo intracelular
formación y la reducción de daños criogénicos de focos de highconcentration
solutos se forma cuando se congela el agua intracelular.
Esto se logra (a) por la congelación lenta para permitir que el agua deje
el celular, pero no tan lentamente que el crecimiento de cristales de hielo se anima,
(B) mediante el uso de un crioprotector...