Critalizacion de la albumina en huevo

Practica # 4
Cristalización de la albúmina de huevo
Objetivo:
El alumno separará por medio de cristalización una proteína, a partir de huevo.
Fundamento:
Las sales neutras ejercen efectos pronunciados sobre proteínas globulares, esta capacidad para influir en la solubilidad de las proteínas esta en función de su fuerza iónica, que constituye una medida, tanto de la concentracióncomo del número de las cargas eléctricas existentes en los cationes y los aniones aportados por la sal6 .
A baja concentración, las sales incrementan la solubilidad de muchas proteínas, fenómeno que recibe el nombre de solubilización por salado. Las sales de iones divalentes tales como el MgCl2 y el (NH4)2S04 son más eficaces en la solubilización de las proteínas que en las sales de ionesmonovalentes tales como el NaCI, NH4CI y el KCI.
La adición de disolventes orgánicos miscibles en agua, particularmente etanol y acetona, disminuye la solubilidad de la mayor parte de las proteínas globulares en el agua, de tal manera que participan de su disolución7.
Material y reactivos:
Material de laboratorio
Probeta de 200ml Embudo de filtración Varilla de vidrio Gasa
Reactivos:Ácido acético 1N
Solución de sulfato de amonio al 50%
Material biológico:
3 Huevos
Procedimiento:
Medir 20 ml de clara de huevo.
Agitar las claras y añadir 0.2 ml de ácido acético 1N, se filtra para romper las membranas agitando fuertemente con una varilla para acelerar el paso por la gasa.
Se añade un mismo volumen de solución de (NH4)2S04 al 50%, y se separa porcentrifugación el precipitado de globulina de huevo obtenido en 30 a 60 minutos.
Se añade lentamente al sobrenadante que es de color amarillo transparente, (NH4)2S04 al 50%, la cantidad añadida dependerá de la formación de al 50%, se torna de color blanco lechoso, se observa precipitación.
Se agita esporádicamente.
Se deja la mezcla en el refrigerador durante 2 a 5 días.Se separan los cristales de albúmina por precipitado. El sobrenadante amarillo al centrifugación, ponerse en contacto con el (NH4)2S04.
Resultados:
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Como se puede observar el precipitado fue de color amarillo
HOJA DE REPORTE
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Los cristales son de color banco y aparecen suspendidos en la solución de sulfato de amonioDiscusión : Al batir un huevo estamos aumentando la superficie de contacto con el aire al introducirse las burbujas de aire entre las proteínas modificando las interacciones hidrofobicas al desnaturalizar las proteínas del huevo cuando la proteína se enfrenta a una burbuja de aire los restos hidrofobicos se orientan hacia las burbujas de aire y los hidrofilicos hacia el agua impidiendo que lasproteínas se enlacen entre ellas como ocurriría al calentar .Esta disposición de las proteínas permite capturar las burbujas de aire dentro de la clara dando a la mezcla una estabilidad estructural. La gran viscosidad de la clara batida se debe a las proteínas.
Se utiliza sulfato de amonio porque las proteínas como otros coloides son precipitadas con soluciones concentradas de sales de amonioaparentemente la precipitación se debe a la neutralización y deshidratación de la molécula seguida de agregación y precipitación.
Conclusión La cristalización es el proceso que conlleva a la purificación de un producto químico por solidificación a partir de una mezcla líquida. Y en bioquímica es muy importante pues ya que con este método se logra conocer la estructura de la proteína.
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