Criterio de identificación de fitopatogenos (hongos, bacterias y virus).

 Etapa 1: diagnostico de enfermedades.
Actividad extra-aula nº 4: inoculación de fitopatogenos

- Criterio de identificación de fitopatogenos (hongos, bacterias y virus).






Los virus son partículas muy pequeñas que sólo pueden verse con la ayuda de un microscopio electrónico,se multiplican en células vivas y son transmitidas a plantas sanas por medio de insectos, nemátodos, hongos o contacto mecánico. Generalmente tienen dos componentes básicos: ácido nucléico (ácido ribonucléico, RNA; o ácido desoxirribonucléico, DNA) y proteínas.
El ácido nucléico contiene la información que determina las propiedades de los virus como: forma y tamaño de la partícula, propiedadesgenerales de la cubierta proteica y probablemente las relaciones con sus vectores.
La proteína es el componente que se halla en mayor concentración y su función es la encapsidación del ácido nucléico. Las propiedades inmunológicas dependen de la proteína y posiblemente en el caso de algunos virus es necesaria para iniciar la infección y tiene una función importante en la transmisión por vectores.Los viroides son los agentes causantes de enfermedades más pequeñas que se conocen, y se componen básicamente de un ácido nucleico, RNA, sin cubierta proteica.
Métodos de Detección
Para la detección e identificación de los virus y tiroides por ejemplo en cítricas se utilizan diversos métodos, de los cuales son los más importantes:
b. Pruebas serológicas.
Se han utilizado para la deteccióndel virus de la Tristeza. Estas pruebas se denominan:   a) anticuerpos fluorescentes; b) inmunodifusión con SDS, c) ELISA y d) microprecipitación. Estas pruebas u otras no se utilizan para la detección de Psorosis, dado que no se ha podido preparar un antisuero contra este virus. En el caso de los viroides de la Xilosporosis y Exocortis no ha sido posible el uso de las pruebas serológicas, dadoque estos patógenos carecen de cubierta proteica. Actualmente, la prueba serológica más difundida es la de ELISA.
c. Electroforesis
Esta técnica se ha utilizado en la detección de Exocortis, mediante geles de poliacrilamida, por ser este viroide un RNA de peso molecular bajo
d. Microscopía electrónica
Esta técnica se ha utilizado en la detección de Tristeza, utilizando preparacionesparcialmente purificadas. Es un método que requiere un equipo de costo muy alto y es de baja sensibilidad en el diagnóstico del virus en ciertos cultivares.
PRINCIPIOS BÁSICOS DE SEROLOGÍA
Si un animal de sangre caliente es infectado con un agente que causa enfermedad, tal como una bacteria o un virus, aparecen en su sangre, como respuesta a la infección, proteínas del tipo de las globulinas. Estasproteínas son denominadas anticuerpos y el agente estimulador de su producción, que es combinado con ellos "in vitro" se denomina antígeno.
Un animal puede producir anticuerpos no solamente en respuesta a la infección con un agente causante de enfermedad, sino también con una gran cantidad de materiales extraños, generalmente proteínas y polisacáridos. El suero que contiene anticuerpos puede serseparado del animal y se le denomina antisuero, mientras que al suero proveniente de un animal, al que nunca se le ha inyectado un material antigénico, se le denomina suero normal. Cuando el antisuero es apropiadamente preparado, es tan específico que sólo reacciona con el virus (antígeno) que indujo la producción de anticuerpos. Con el fin de producir antisueros específicos para un determinado virus,éste debe ser inyectado al animal (generalmente un conejo) que se inmuniza en forma pura y no alterada, para lo cual el virus debe ser purificado por cualquier método que demuestre ser eficiente.
La vía (intramuscular, subcutánea, etc.) y el número de inyecciones, el intervalo entre las mismas y la cantidad de virus que debe inyectarse a un animal, con el fin de obtener antisueros con alta...