Cromatografía de filtración en gel
Páginas: 3 (621 palabras)
Publicado: 25 de octubre de 2013
CROMATOGRAFÍA DE FILTRACIÓN EN GEL
La cromatografía de filtración en gel o exclusión molecular es un proceso en que los componentes de una muestra se separan en función de su tamaño. Laseparación se realiza en una columna que contiene un gel que forma esferas con poros de un determinado diámetro, compuestas de un polímero insoluble, pero altamente hidratado, tales como dextrano y agarosa(carbohidratos) o poliacrilamida. Sephadex, Sepharosa y Biogel son preparaciones comerciales de estas bolitas usadas normalmente (García, 2009).
La fase estacionaria la forma el gel, que seintroduce en una columna y la fase móvil la forma el disolvente que fluye por el exterior del gel. Las moléculas grandes no entran en los poros de las esferas del gel y por ello resbalan (“eluyen”) muyrápidamente por la superficie de las esferas, y salen en el llamado volumen de exclusión de la columna. Las moléculas pequeñas entran en los poros de las esferas del gel y se retrasan en su desplazamiento,por lo que eluyen más lentamente de la columna. El resto de las moléculas, de tamaño intermedio, presentan una mayor o menor facilidad para difundir al interior de las esferas en función de su tamaño,siendo extraídas fraccionadamente (Universidad Rey Juan Carlos, 2010; Caballero Repullo, 2010).
Cuanto mayor es una molécula, menos capacidad tiene para acceder al interior de las esferas del gely, por tanto, menor es el volumen de líquido que se requiere para extraerla de la columna.
Teniendo en cuenta que para las proteínas globulares el tamaño está, en general, relacionado con el pesomolecular, este tipo de cromatografía separa las sustancias en función de dichos pesos moleculares, obteniéndose primero las más pesadas.
En el interior de una columna de cromatografía puedendistinguirse los volúmenes:
a) Total (Vt), que es el volumen que ocupa el cilindro de gel hidratado.
b) De vacío (Vo), o el volumen existente entre las esferas del gel.
c) El ocupado por las...
La cromatografía de filtración en gel o exclusión molecular es un proceso en que los componentes de una muestra se separan en función de su tamaño. Laseparación se realiza en una columna que contiene un gel que forma esferas con poros de un determinado diámetro, compuestas de un polímero insoluble, pero altamente hidratado, tales como dextrano y agarosa(carbohidratos) o poliacrilamida. Sephadex, Sepharosa y Biogel son preparaciones comerciales de estas bolitas usadas normalmente (García, 2009).
La fase estacionaria la forma el gel, que seintroduce en una columna y la fase móvil la forma el disolvente que fluye por el exterior del gel. Las moléculas grandes no entran en los poros de las esferas del gel y por ello resbalan (“eluyen”) muyrápidamente por la superficie de las esferas, y salen en el llamado volumen de exclusión de la columna. Las moléculas pequeñas entran en los poros de las esferas del gel y se retrasan en su desplazamiento,por lo que eluyen más lentamente de la columna. El resto de las moléculas, de tamaño intermedio, presentan una mayor o menor facilidad para difundir al interior de las esferas en función de su tamaño,siendo extraídas fraccionadamente (Universidad Rey Juan Carlos, 2010; Caballero Repullo, 2010).
Cuanto mayor es una molécula, menos capacidad tiene para acceder al interior de las esferas del gely, por tanto, menor es el volumen de líquido que se requiere para extraerla de la columna.
Teniendo en cuenta que para las proteínas globulares el tamaño está, en general, relacionado con el pesomolecular, este tipo de cromatografía separa las sustancias en función de dichos pesos moleculares, obteniéndose primero las más pesadas.
En el interior de una columna de cromatografía puedendistinguirse los volúmenes:
a) Total (Vt), que es el volumen que ocupa el cilindro de gel hidratado.
b) De vacío (Vo), o el volumen existente entre las esferas del gel.
c) El ocupado por las...
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