Cromatografía De Intercambio Iónico

Universidad Nacional Autónoma de México. Instituto de Biotecnología. Campus Cuernavaca, Morelos |
CROMATOGRAFÍA DE INTERCAMBIO IÓNICO |
TRABAJO MONOGRÁFICO DEL CURSO: MÉTODOS FISICO-QUÍMICOS EN BIOTECNOLOGÍA |

Contenido
CROMATOGRAFÍA 5
PERSPECTIVA HISTÓRICA 5
Desarrollo Inicial 5
Aplicación y Desarrollo Activo 6
Principios del Desarrollo Moderno 7
PRINCIPIOS TEÓRICOS 9Ventajas y desventajas 10
MÉTODOS DE CROMATOGRAFÍA DE INTERCAMBIO IÓNICO 10
Cromatografía de Elusión 10
Cromatografía Frontal 11
Cromatografía de Desplazamiento 11
Cromatografía líquida de alta eficiencia (HPLC) 12
TECNICAS DE SEPARACIÓN: LOTE O COLUMNA 12
TEORIA DE SEPARACIÓN 12
Modelo del desplazamiento estequiométrico (SDM) 13
Modelos no estequiométricos 13
COMPONENTES DEL SISTEMACROMATOGRÁFICO DE INTERCAMBIO IÓNICO 14
Instrumentación y material 14
Detectores 14
Fase estacionaria y Fase móvil 15
Fase estacionaria 16
Características de soportes usados en la fase estacionaria 17
Elección de la fase estacionaria 18
Configuración de la fase estacionaria 20
Desarrollo actual de fases estacionarias 21
Fase Móvil 22
Elección de la fase móvil 22
ETAPASMETODOLÓGICAS DE LA IEC 24
Equilibración 24
Aplicación y adsorción de la muestra. 24
Preparación de la muestra 24
Clarificación de la muestra 25
Intercambio de buffer y desalado 27
ENSAYOS ANALÍTICOS DURANTE LA PURIFICACIÓN 27
Elución 28
Elución por cambio de pH 28
Elución por cambios en la concentración de sal 29
Técnicas de formación de gradientes 29
Desorción final 31Reequilibración 31
PARÁMETROS TEÓRICOS QUE AFECTAN LA SEPARACIÓN 32
Resolución 32
EFICIENCIA 33
SELECTIVIDAD 35
Selectividad y elusión 36
FACTOR DE CAPACIDAD 37
APLICACIONES 38
Separación de proteínas 38
Proteómica 39
Purificación de proteínas a gran escala (Downstream processing) 39
Aplicaciones analíticas 40
TERMINOLOGÍA (Ettre, 1993) 41
Bibliografía 44

CROMATOGRAFÍA

Deacuerdo con la IUPAC la cromatografía es un método, usado primariamente para la separación de componentes de una muestra, en la cual los componentes se distribuyen en dos fases, una de las cuales es estacionaria, mientras la otra se mueve (BIBLIO LIBRO HPLC). En este sentido existen diversos tipos de cromatografía y pueden clasificarse de acuerdo a:

* La naturaleza de la fase móvil: Si lafase móvil es una gas, la modalidad cromatográfica se denomina gaseosa (GC) y si es un líquido, cromatografía líquida (LC).

* La naturaleza de la fase estacionaria: Si la fase estacionaria es un sólido y la fase móvil un líquido la cromatografía se denomina cromatografía líquido-sólido (LSC). Asi mismo existe una cromatografía líquido-líquido (LLC), gas líquido (GLC) y gas sólido (GC).* Fenómeno que ocurre dentro de la columna: modalidades de afinidad y por tamaño molecular. Entre las primeras se encuentra la cromatografía en fase normal, en fase ligada y la de intercambio iónico. las modalidades de afinidad el analito interactúa directa o indirectamente con la fase estacionaria, mientras que en las separaciones por tamaño molecular no existe ninguna interacción con la faseestacionaria.

* El dispositivo usado para conseguir el contacto entre la fase móvil y la estacionaria: cromatografía en columna si se usa un tubo cilindrico y cromatografía plana en la que el soporte es una placa plana (cromatografía en capa fina) o los intersticios d eun papel (cromatografía en papel)

Para este efecto nos ocuparemos de la cromatografía de intercambio iónico

PERSPECTIVAHISTÓRICA

La cromatografía de intercambio iónico (IEC) es una técnica ampliamente usada para la separación de diferentes tipos de moléculas, sin embargo el desarrollo de esta metodología ha sido parte de un proceso experimental, teórico y tecnológico a través del tiempo. En esta sección se detallará el desarrollo histórico de la IEC con el fin de entender el camino que ha conducido a lo que...