Cromatografía En Capa Fina, Papel, Radial, Y Columna

Cromatografía en capa fina, papel, radial, y columna
Objetivos:
Familiarizarse con la preparación de placas para cromatografía. Aplicar la técnica de cromatografía en capa fina para la separación e identificación de azucares en diferentes muestras biológicas.
Separar los colorantes sintéticos utilizados en alimentos por medio de cromatografía radial.
Separar una mezcla de compuestosquímicamente semejantes para su identificación.
Extraer y separar los pigmentos fotosintéticos de hojas verdes de plantas mediante cromatografía en capa fina y determinar el espectro de absorción de cada uno de los pigmentos extraídos.
Introducción:
El botánico ruso Mikhail S. Tsvet formalizó el uso de la cromatografía en los estudios científicos -por el año 1910-, dio ese nombre a la técnica y laaplicó a la separación de los pigmentos naturales que se encuentran en las plantas (conocidos como carotenoides y clorofilas).
La cromatografía se define como la separación de una mezcla de dos o mas compuestos por distribución entre dos fases, una de las cuales es estacionaria y la otra una fase móvil. Varios tipos de cromatografía son posibles, dependiendo de la naturaleza de las dos fasesinvolucradas: sólido-liquido (capa fina, papel o columna), liquido-liquido y gases-liquido (fase vapor).
Todas las técnicas cromatográficas dependen de la distribución de los componentes de la mezcla entre dos fases inmiscibles: una fase móvil, llamada también activa, que transporta las sustancias que se separan y que progresa en relación con la otra, denominada fase estacionaria. La fase móvil puedeser un líquido o un gas y la estacionaria puede ser un sólido o un líquido.
Todos los sólidos finamente pulverizados tienen el poder de adsorber en mayor o menor grado otras sustancias sobre su superficie; y, similarmente, todas las sustancias pueden ser adsorbidas, unas con más facilidad que otras. Este fenómeno de adsorción selectiva es el principio fundamental de la cromatografía.
Rf es elregistro y se define como: Rf = distancia que recorre la muestra desde el punto de aplicación / distancia que recorre el disolvente hasta el frente del eluyente (La fase móvil que abandona la columna).
El valor de Rf depende de las condiciones en las cuales se corre la muestra (tipo de adsorbente, eluyente, así como las condiciones de la placa, temperatura, vapor de saturación, etc.). Tieneuna reproducibilidad de ± 20%, por lo que es mejor correr duplicados de la misma placa.

Material:
Placas de vidrio.
Varillas de vidrio.
Cámara cromatográfica.
Vasos de precipitado.
Making tape.
Estufa.
Centrífuga.
Atomizador.
Campana de extracción.
Cajas de petri.
Micropipetas.
2 tiras de papel filtro.
2 frascos con disolvente y tapa.
Parrilla eléctrica.
Pipeta Pasteur.
Papelsanitario.
Algodón.
Vasos de precipitado.
Arena fina estéril.

Reactivos:
Sulfato de calcio.
Sílica gel G-60 para cromatografía en capa fina.
Estándares de carbohidratos (sacarosa, glucosa, fructosa, etc) disueltos al 1% en isopropanol al 10%.
Fase móvil: acetato de etilo: isopropanol: agua: piridina en relación 26:14:7:2.
Reactivo de anilina-difenilamina (5 vol. De anilina al 1% enacetona, 5 vol. De difenilamina al 1% en acetona y 1 vol. De H3PO4 85%).
Metanol.
Diferentes colores cintéticos utilizados en la industria alimenticia.
Fase móvil (propanol:ácido acético:agua, en relación 4:1:1).
Muestras de aminoácidos.
Solucón disolvente (butanol: ácido acético: agua; 4:1:1).
Solución reveladora de ninhidrina.
Diferentes colores sintéticos utilizados en la industriaalimentaria.
Fase móvil (propanol: ácido acético: agua, en relación 4:1:1).

Procedimiento 1.

Procedimiento 2:

Procedimiento 3

Procedimiento 4

Cuestionario:
1. ¿Cuáles son los tipos de fase estacionaria utilizados para la cromatografía de capa fina?
Principalmente se utiliza alúmina o gel de sílice.
2. ¿Cuáles son los principales colorantes sintéticos y naturales que se...