Cromatografía en capa fina

CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA

Gipsy Abril Peña Ramírez*

*Universidad del Atlántico, Facultad de Ciencias Básicas, Programa de Química.

Abstract

The TLC is one of the most widely accepted Chromatographic methods in the study of proteins and amino acids, it is a method that requires little time, cost and sample.
For the chromatographic study used a source of protein, which was due priorto the study refer to a method to fragment and to obtain free amino acids, using a stationary phase, usually silica gel, and a mobile phase solvent mixture, and the technique is one the affinity each amino acid for each phase of this mode if the component has more affinity to the mobile phase migrates with it but if you have more affinity to the stationary phase their journey will be slower. Atthe end of the process reveals the plate and determine qualitatively the components of the sample.

Resumen

La cromatografía en capa fina es uno de los métodos cromatograficos de mayor aceptación en el estudio de las proteínas, y aminoácidos, pues es un método que demanda poco tiempo, gasto y muestra.
Para el estudio cromatografico se utiliza una fuente de proteína, la cual previo al estudiose debió someter a algún método para fragmentarla y obtener los aminoácidos libres, se utiliza una fase estacionaria, usualmente silica gel, y una fase móvil, mezcla de solventes, y la técnica consiste un la afinidad que tiene cada aminoácido con cada fase, de este modo si el componente posee mas afinidad a la fase móvil migra con ella pero si posee mas afinidad a la fase estacionaria su recorridoserá mas lento. Al finalizar el proceso se revela la placa y se determina cualitativamente los componentes de la muestra.


Introducción

En la cromatografía en capa fina, CCF o TLC ("thin-layer chromatography, en la terminología inglesa) se puede utilizar como soporte cualquier sustancia que pueda dividirse en partículas finas y distribuirse uniformemente en forma de láminas. Esto incluyesustancias inorgánicas (gel de sílice, óxido de aluminio, tierra de diatomeas, silicato de magnesio, etc) y orgánicas (celulosa, poliamida, polietileno, etc). La utilización de soportes hidrófobos facilita la separación de compuestos no polares (lípidos, por ejemplo). En la CCF, la fase estacionaria es una lámina de 0,25-0,50 mm de espesor, extendida de forma uniforme sobre la superficie de unaplaca de vidrio o plástico. Aunque muchas casas comerciales suministran placas ya preparadas, éstas pueden hacerse en el laboratorio con aparatos especiales que permiten extender sobre la placa de vidrio o plástico la “papilla” formada por la suspensión del material en un disolvente adecuado (generalmente agua). Muy frecuentemente se emplea para este tipo de placas silica gel la cual permite eldesarrollo de la técnica gracias a su polarizas la cual se debe a la presencia de grupos hidroxilos esto permite una alta interacción con analitos polares. La placa ha de dejarse secar antes de su utilización.
Para el desarrollo de la cromatografía, las muestras, en un disolvente adecuado, se aplican puntualmente con la ayuda de jeringas, micropipetas o capilares en un extremo de la placa. El volumende muestra a aplicar es crítico, ya que va a afectar a la resolución (separación de los componentes de una mezcla compleja), y depende de la concentración del compuesto o compuestos de interés en la muestra. Para soluciones concentradas bastará una cantidad muy pequeña (rango de μl) para aplicar suficiente cantidad de los solutos a separar sin llegar a saturar la capacidad de resolución de laplaca cromatográfica. Para soluciones muy diluidas, deberá aplicarse un volumen suficiente (de hasta varios ml) para asegurar una cantidad detectable de soluto o solutos de interés. Una vez aplicada y seca la muestra, la placa se introduce en un recipiente cerrado (tanque cromatográfico) y uno de los extremos (el más próximo a la línea de aplicación) se sumerge en un disolvente apropiado (fase...