Cromatografía por intercambio iónico


SEPARACIÓN DE UNA MEZCLA DE DOS AMINOÁCIDOS UTILIZANDO CROMATOGRAFÍA POR INTERCAMBIO IÓNICO

OBJETIVOS
Emplear la técnica de intercambio iónico para la separación de dosaminoácidos.
Comprobar la separación mediante una reacción colorida y el perfil de elución.
FUNDAMENTO
Para la cromatografía de intercambio iónico s emplea una columna con resina que se une al analito deinterés, donde la interacción se basa en la carga neta. Una resina de intercambio iónico tiene un ligando con carga positiva o negativa. Si la resina tiene carga negativa, es un intercambiador decationes; si tiene carga positiva, es un intercambiador de aniones. Se carga una mezcla de proteínas en la columna y se permite que fluya por ella. Las proteínas cuya carga neta sea opuesta a la delintercambiador se quedarán en la columna, intercambiándose por los contraiones unidos, las proteínas sin carga o carga opuesta a la del intercambiador saldrán con el eluyente. Una vez que hayan salido todaslas proteínas que no se unen al intercambiador, el eluyente se cambiará por un amortiguador cuyo pH anule la carga de las proteínas unidas o bien por uno con una concentración alta de sales. Esteúltimo competirá con las proteínas unidas por el espacio limitado de unión en la columna y las proteínas saldrán con el eluyente.
RESULTADOS
Tabla 1. Separación de Prolina e histidina
Vol. De elución(mL)
Prolina
(A400)
Histidina
(A570)
Vol. De elución (mL)
Prolina
(A400)
Histidina
(A570)
Vol. De elución (mL)
Prolina
(A400)
Histidina
(A570)
3
0

39
0.492
0.12
75

0.175
6
042
0.419
0.133
78

0.371
9
0

45
0.285
0.099
81

0.206
12
0

48

0.087
84

0.186
15
0.02

51

0.086
87

0.189
18
0.331

54

0.081
90

0.089
21
0.665

570.077
93

0.143
24
0.835

60

0.05
96

0.155
27
0.847

63

0.141
99

0.131
30
0.708

66

0.066
102

0.116
33
0.728

69

0.066
105

0.118
36
0.631

72...