cromatografía y electroforesis



INFORME DE LABORATORIO III
BIOLOGIA DE LA CELULA I
ANALISIS DE MACROMOLECULAS
ELECTROFORESIS- CROMATOGRAFIA











FEBRERO 28 DE 2012

TABLA DE CONTENIDO
INTRODUCCION
MARCO TEORICO Fichas De Bioseguridad
OBJETIVOS
Generales
Específicos
METODOLOGÍA
Materiales
Procedimiento
RESULTADOS
ANALISIS Y DISCUSION DE RESULTADOSCONCLUSIONES
BIBLIOGRAFIA
ANEXOS
Cálculos Rf

INTRODUCCION
En nuestra vida cotidiana, siempre ha existido la necesidad de analizar los componentes de diferentes sustancias y en especial de macromoléculas de gran importancia biológica como las proteínas y a lo largo de la historia se han desarrollado técnicas de estudio y análisis de éstas.
En ésta ocasiónanalizaremos dos de las técnicas más utilizadas, fáciles y confiables que tenemos: la elecroforesis, para separar los componentes proteínicos de una muestra biológica humana, y la cromatografía, para separar los componentes de muestras orgánicas e inorgánicas analizando su disposición y sus rangos de colores.
Así estudiaremos más a fondo las macromoléculas y su análisis aplicándolo, por supuesto,al ámbito médico.














MARCO TEORICO

La cromatografía es una técnica utilizada originalmente para separar sustancias que tengan peso molecular bajo, algunos azucares y aminoácidos, hoy es utilizada para purificar proteínas rompiendo las mezclas en cada uno de sus componentes y separándoles a lo largo de la fase estacionaria, siendo un implemento muy útil paraseparar, analizar e identificar los componentes de sustancias mezcladas. Para asegurar un alto grado de pureza en una proteína a menudo es bueno y recomendable realizar varias técnicas seguidas como son:
1. Cromatografia en columna, donde las proteínas se separan de acuerdo a las propiedades de la matriz(carga, tamaño, afinidad etc) se aplican por la parte superior de la columna la mezcla deproteína, que se va lavando con un solvente o buffer que hace bajar las proteínas separándolas en orden de salida por la parte inferior
Estas matrices pueden ser: geles de celulosa u otros porosos, llamada de filtración en gel resinas cargadas negativa o positivamente para hacer una de intercambio ionico, cationico si une grupos con carga positiva o anionico si une grupos con carga negativa tambiénla matriz puede ser un liquido que tiene unidas moléculas con gran afinidad por una proteína determinada de nuestro interés lo que va a formar la cromatografía de afinidad.
Métodos más modernos utilizan altas presiones que aceleran el movimiento de las proteínas, con materiales y matrices de alta calidad que resisten las presiones, a esto se le llama cromatografía liquida de alta presión o HPLC2. Cromatografia de capa delgada: Este tipo consiste en una matriz delgada porosa como el papel de filtro o laminas de celulosa donde se colocan muestras de la proteína, a continuación se introduce en un recipiente que contiene el eluyente el cual sube por la lamina desplazando las proteínas o los compuestos de la mezcla implantada, de acuerdo a su velocidad y las características de cada uno,formando un patrón cromatografico (proteína y rama)
Por otro lado, la electroforesis es otra importante técnica de separación de proteínas basada en el desplazamiento de las proteínas cargadas en un campo eléctrico. Las moléculas con carga neta positiva migran al polo negativo mientras que las moléculas con carga neta negativa se mueven hacia el electrodo con carga positiva
Esta técnica seutiliza para realizar en la mayoría de los casos el análisis de componentes orgánicos ya que a menudo los métodos electroforéticos afectan la estructura y función de las proteínas.
Luego de que se realiza la migración de las proteínas se debe tratar con un colorante como el azul de coomasie que tiñe las proteínas pero no el gel luego de que se sumerge en una solución decolorante y una de secado...