Cromatografía

Práctica 5. Cromatografía

Objetivos
1. Entender los fundamentos de la técnica de cromatografía.
2. Observar las diferencias entre cromatografía en capa fina y cromatografía de líquidos.
3. Conocer el equipo para efectuar la cromatografía.
4. Realizar la técnica de cromatografía en capa fina para separar clorofilas de hojas verdes
5. Realizar la técnica de cromatografía de líquidos paracuantificar cafeína en bebidas que la contienen.

I.- Introducción teórica

La cromatografía es una técnica de separación basada en la diferente velocidad con que se mueven los solutos a través de un medio estacionario mediante el flujo de un disolvente llamado eluyente.
Ésta técnica se originó aproximadamente en 1850 por F. F. Runge, químico alemán especializado en colorantes, el cualdescribió el proceso de separación que se conoce actualmente como cromatografía en papel. Corresponde al botánico ruso Mijail Tswett haber establecido, entre 1903 y 1910, las ventajas de la cromatografía y la adopción parcial de la terminología, así como haber sentado las bases de los principales procedimientos experimentales relativos a ésta técnica. En 1903, logró la separación de los componentes delas hojas verdes en una columna de sulfato de calcio, dándole a ésta técnica el nombre de cromatografía; aunque en la actualidad sirve para separar cualquier tipo de sustancias, tanto coloridas, como incoloras.

La cromatografía es una técnica que permite la separación de los componentes de una mezcla debido a la influencia de dos efectos contrapuestos.
a) Retención. Efecto producido sobre loscomponentes de la mezcla por una fase estacionaria, que puede ser un sólido o un líquido anclado a un soporte sólido.
b) Desplazamiento. Efecto ejercido sobre los componentes de la mezcla por una fase móvil, que puede ser un líquido o un gas.

El fenómeno de migración de los componentes de una mezcla a lo largo de la fase estacionaria, impulsados por la fase móvil, recibe el nombre de elución.La mezcla a separar se deposita sobre la fase estacionaría, mientras que la móvil atraviesa el sistema desplazando a los componentes de la mezcla a distinta velocidad, dependiendo de la magnitud de sus interacciones relativas con ambas fases. Las dos fases se eligen de forma que los componentes de la muestra se distribuyan de modo distinto entre la fase móvil y la fase estacionaria. Aquelloscomponentes que son fuertemente retenidos por la fase estacionaria se mueven lentamente con el flujo de la fase móvil; por el contrario los componentes que se unen débilmente a la fase estacionaria, se mueven con rapidez. Como consecuencia de la distinta movilidad, los componentes de la muestra se separan en bandas o zonas discretas que pueden analizarse cualitativa y/o cuantitativamente.

TIPOS DECROMATOGRAFÍA.
Dependiendo de la naturaleza de la fase estacionaria y de la fase móvil se pueden distinguir distintos tipos de cromatografía
a) Cromatografía sólido-líquido. La fase estacionaria es un sólido y la móvil un líquido.
b) Cromatografía líquido-líquido. La fase estacionaria es un líquido anclado a un soporte sólido.
c) Cromatografía líquido-gas. La fase estacionaria es un líquido novolátil impregnado en un sólido y la fase móvil es un gas.
d) Cromatografía sólido-gas. La fase estacionaria es un sólido y la móvil un gas.

Según el tipo de interacción que se establece entre los componentes de la mezcla y la fase móvil y estacionaria podemos distinguir entre:
a) Cromatografía de adsorción. La fase estacionaria es un sólido polar capaz de adsorber a los componentes de lamezcla mediante interacciones de tipo polar.
b) Cromatografía de partición. La separación se basa en las diferencias de solubilidad de los componentes de la mezcla en las fases estacionaria y móvil, que son ambas líquidas.
c) Cromatografía de intercambio iónico. La fase estacionaria es un sólido que lleva anclados grupos funcionales ionizables cuya carga se puede intercambiar por aquellos iones...