Cromatografía

LA PRÁCTICA NO. 1:
Cromatografía”

Introducción:

Los biólogos, médicos y químicos necesitan con frecuencia separar los componentes de una mezcla como paso previo a su identificación, es por ello que se creo la cromatografía.

En 1906 Tswett definió la cromatografía como:
Método en el cual los componentes de una mezcla son separados en una columna adsorbente dentro de un sistemafluyente.

Recientemente la I.U.P.A.C define la cromatografía de forma más amplia como: Método usado principalmente para la separación de los componentes de una muestra, en el cual los componentes son distribuidos entre dos fases, una de las cuales es estacionaria, mientras que la otra es móvil. La fase estacionaria puede ser un sólido o un líquido soportado en un sólido o en un gel (matriz). La faseestacionaria puede ser empaquetada en una columna, extendida en una capa, distribuida como una película, etc...

Se utiliza el término general de lecho para definir las distintas formas en que puede encontrarse la fase estacionaria. Las separaciones cromatográficas se consiguen mediante la distribución de los componentes de una mezcla entre la fase fija y la fase móvil. La separación entre dossustancias empieza cuando una es retenida más fuertemente por la fase estacionaria que la otra, que tiende a desplazarse más rápidamente en la fase móvil.

Las retenciones mencionadas pueden tener su origen en dos fenómenos de interacción que se dan entre las dos fases y que pueden ser:

1.-La adsorción, que es la retención de una especie química por parte de los puntos activos de la superficiede un sólido quedando delimitado el fenómeno a la superficie que separa las fases o superficie interfacial.

2.- La absorción, que es la retención de una especie química por parte de una masa, y debido a la tendencia que esta tiene a formar mezcla con la primera, absorción pura, o a reaccionar químicamente con la misma, absorción con reacción química, considerando ambas como un fenómeno másicoy no superficial.

En resumen la cromatografía es la distribución de una sustancia o partícula en dos fases, bien por cristalización (líquido-sólido), destilación (líquido-vapor) o sublimación (sólido-vapor).

La cromatografía en papel se basa en el reparto. La distribución de moléculas en dos fases. Estas dos fases serían:
 Fase móvil: una capa de solvente orgánico que asciende porcapilaridad por el papel y sobre la capa hidratada sin mezclarse con ella.

 Fase estacionaria: la capa hidratada.
Ya que el movimiento se restringe al solvente orgánico, es el tiempo que permanezcan en esta fase el que determinará la distancia recorrida; a más tiempo, más distancia. Esto suele significar que el compuesto que más distancia recorre es más apolar ya que permanece más tiempo en elsolvente afín.

Tipos de cromatografía en columna

El principio de separación de la cromatografía es la aplicación de un criterio de separación a las proteínas que se desplazan a lo largo de una matriz sólida porosa. Este criterio de separación se basa en alguna propiedad que es diferentes entre las proteínas que se quieren separar: peso molecular, carga eléctrica, afinidad de una de ellas poralguna otra, etc...

En función de cual sea el criterio de separación que se aplique diferenciamos tres tipos de cromatografía en columna:

 Cromatografía de intercambio iónico:
La cromatografía de intercambio iónico se realiza sobre matrices que tienen una carga neta, positiva en el esquema. La carga de la matriz de la columna así como la carga de las proteínas dependerá del pH del solvente yde su fuerza iónica (proporcional a la concentración de iones).

 Cromatografía de filtración en gel
La cromatografía de filtración en gel se realiza empleando unas matrices formadas por unas esferas porosas. El volumen de los poros es muy elevado y su diámetro está determinado. Cuando penetran en el lecho de la columna dos proteínas de tamaños tales que una penetra en los poros de las...