Cromatograf a De Exclusion Molecular
Molecular
Jacob Canales Delgado
Objetivo:
Separación de proteínas por cromatografía en
columna según el tamaño y la forma.
Fundamento:
La cromatografía es unatécnica que permite la
separación de moléculas diferentes presentes en una
misma muestra.
La cromatografía de exclusión molecular (también
llamada filtración en gel) es una técnica empleada en
laseparación de proteínas y ácidos nucleicos. Este
tipo de cromatografía se realiza en columnas
cilíndricas rellenas con algunos de los geles
Es un método de cromatografía en columna por el cual lasmoléculas se
separan en solución según su peso molecular, o más precisamente,
según su radio de Stokes.
Cuando se hace pasar una mezcla de moléculas de distinto tamaño,
aquellas moléculas con untamaño mayor que el diámetro de los poros
de las partículas, sólo podrán moverse en su camino, en el espacio que
queda entre las partículas; y por lo tanto, no se verán retrasadas en su
descenso.
En cambio aquellas moléculas capaces de penetrar en las partículas se
verán retrasadas por la fase estacionaria; en mayor medida, cuanto
menor sea su tamaño.
Por lo tanto, las moléculas eluyen eneste tipo de cromatografía por
orden decreciente de tamaño molecular.
Factores que influyen en la separación:
- Longitud de la columna. La capacidad de separación de sustancias de
diferentetamaño aumenta con la longitud de la columna.
- Flujo. La resolución de la separación disminuye al aumentar el flujo del
líquido con que son arrastradas las moléculas a lo largo de la columna.
- El volumen de la muestra a cromatografiar debe ser pequeño
comparado con el volumen total de la columna.
- Empaquetado del gel en la columna. Las propiedades separadoras del
gel se alteranprofundamente, e incluso desaparecen, cuando un gel no
está empaquetado homogéneamente en la columna o se encuentra
excesivamente comprimido.
Aplicaciones:
Purificación de ADN en plantas.
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