Cromatograf A Liquida De Alta Eficiencia Hpls High

CROMATOGRAFÍA LIQUIDA DE ALTA
EFICIENCIA HPLS (HIGH
PERFORMANCE LIQUID
CHROMATOGRAPHY)
Diana Paola Aguilar Ramírez
Sergio Luis Briones Leal
José de Jesús Calzada Torres
Juan Adolfo Reyes Tenorio
Cuauhtémoc Adán Vallin Delgado

Introducción


La cromatografía engloba a un conjunto de
técnicas de análisis basadas en la separación de
componentes de una mezcla y su posterior
detección. Las técnicascromatográficas son muy
variadas, pero en todas ellas hay una fase móvil
que consiste en un fluido (gas, líquido, o fluido
supercrítico) que arrastra a la muestra con un flujo
constante de presión proporcionado por una
bomba, hasta llegar al punto donde es introducida
la muestra. Siguiendo el flujo de presión la lleva a
una columna donde se encuentra la fase
estacionaria que se trata de un sólidoo un líquido
fijado en un sólido.

la fase estacionaria
y con la fase móvil.
De este modo, los
componentes
atraviesan la fase
estacionaria a
distintas
velocidades y se
van separando.
Después de haber
pasado los
componentes por la
fase estacionaria y
haberse separado,
pasan por un
detector que
genera una señal
que puede
depender de la
concentración y del
tipo del compuesto,
sus partes lo
describela figura.

Principios de la técnica




En la cromatografía líquida, la fase móvil es
un líquido que fluye a través de una
columna que contiene a la fase fija. La
separación cromatográfica en HPLC es el
resultado de las interacciones específicas
entre las moléculas de la muestra en ambas
fases, móvil y estacionaria
A diferencia de la cromatografía de gases, la
cromatografía
de
líquidos
dealto
rendimiento (HPLC, de high-performance
liquid chromatography) no está limitada por
la volatilidad o la estabilidad térmica de la
muestra.





La HPLC es capaz de separar macromoléculas
y especies iónicas, productos naturales
lábiles, materiales poliméricos y una gran
variedad de otros grupos polifuncionales de
alto peso molecular.
Con una fase móvil líquida interactiva, otro
parámetro seencuentra disponible para la
selectividad, en adición a una fase
estacionaria activa. La HPLC ofrece una
mayor variedad de fases estacionarias, lo
que permite una mayor gama de estas
interacciones selectivas y más posibilidades
para la separación.

Sistema de suministro


El papel esencial de las bombas es
impulsar a la fase móvil con presión y
flujo constante, el proceso de inyección
de la muestraen la actualidad es
automática, las columnas que se utilizan
normalmente son de acero inoxidable y
los
detectores
su
papel
fundamentalmente es de indicar el
momento de aparición de los diferentes
componentes
que
constituyen
la
muestra, calificarlo cuantitativamente
como cualitativamente.

Bombas
neumáticas

A.

B.

Bombas
amplificadoras
de aire;
Bomba de
desplazamient
o directo

Bombas demotor
eléctrico

A)

B)

Bombas de
jeringa
Bomba
alternante
(membrana)

Columna


La columna es el elemento fundamental
de un cromatógrafo de líquidos, puesto
que es en ella donde tiene lugar la
separación;
por
lo
tanto,
resulta
fundamental una correcta elección de la
columna adecuada para cada separación,
ya que una columna inadecuada o de
mala calidad nunca se obtendrán buenos
resultados aunque sedisponga del mejor
instrumental.

La columna
- Las partes que
componen la
columna se
muestran en la
figura.
- Las mas utilizadas
son las de relleno
de una fase
estacionaria
adecuada al tipo
de separación que
se pretende llevar
a cabo.

Detectores


Es un dispositivo que permite, a la
salida de la columna, una propiedad
física del eluyente, que deberá
depender de la composición de este.
Ladetección en cromatografía se
realiza, habitualmente, en continuo,
aunque es posible la utilización de
colectores de fracciones para la
identificación y cuantificación de
pequeñas fracciones del eluyente.

Características de la separación
QUE AFECTAN

QUE NO AFECTAN









Volumen de la
cubeta
Constante de tiempo




Respuesta.
Ruido.
Deriva (variación de la
señal de base a lo
largo del...