Cromatografia bidimensional


OBJETIVOS
Separar los aminoácidos presentes en jugo de frutos por cromatografía bidimensional en capa fina.
Identificar los aminoácidos separados por comparación de sus valores de Rf con los de soluciones tipo de aminoácidos.
Comparar el grado de resolución de la cromatografía bidimensional, con el de la unidimensional.


DATOS EXPERIMENTALES

Cromatogramas unidimensionalesI II

La imagen “I” representa al cromatograma unidimensional con la fase móvil de cloroformo-metanol-amoniaco 17% (2.05:2.05:0.9) de los aminoácidos tipo con la muestra problema de jugo de jitomate.
La imagen “II” representa al cromatograma unidimensional con la fase móvil de metano-etano-agua-urea(4.5:4.5:1.0:0.03g) de los aminoácidos tipo con la muestra problema.

Cromatogramas bidimensionales

III IV


En la imagen III y IV se muestra la cromatografia desarrollada de los aminoácidos tipo y el jugo de jitomate respectivamente, con ambas fases móviles.

Calculo de los valores de Rf



Calculo del Rf de lamancha de arginina del cromatograma unidimensional tipo con la fase móvil cloroformo-metanol-amoniaco 17%.

Nota: todos los valores de Rf reportados en las tablas siguientes se calcularon de la misma manera que el anterior.
Tabla 1. Cromatogramas unidimensionales tipo desarrollados en las 2 fases moviles.
Amino-acido
1ª fase móvil
2ª fase móvil

Frente del soluto
Frente del disuelven-te
RfFrente del soluto
Frente del disuelven-te
Rf
Arg
1,4
7,9
0,177
0,1
7,9
0,012
Lys
1,55
7,9
0,196
0,1
7,9
0,012
Pro
4,2
7,9
0,531
2,1
7,9
0,265
Gly
4,3
7,9
0,544
1,1
7,9
0,139
Glu
4,6
7,9
0,588
3,2
7,9
0,405
His
5,45
7,9
0,689
0,1
7,9
0,012
Thr
5,7
7,9
0,721
1,6
7,9
0,202
Tir
6
7,9
0,759
4
7,9
0,506
Met
6,5
7,9
0,822
3,1
7,9
0,392Phe
7,4
7,9
0,936
3,5
7,9
0,443

No. De mancha
1ª fase móvil
2ª fase móvil
Aminoácido correspon-diente

Frente del soluto
Frente del disolvente
Rf
Frente del soluto
Frente del disolvente
Rf

1
1,5
8,8
0,17
0,1
7,8
0,012
Arg
2
1,8
8,8
0,204
0,1
7,8
0,012
Lys
3
4
8,8
0,454
1,2
7,8
0,153
Gly
4
4
8,8
0,454
4,4
7,8
0,564
Phe
5
4,2
8,8
0,477
1,3
7,80,166
Pro
6
5,3
8,8
0,602
0,1
7,8
0,012
His
7
5,4
8,8
0,613
1,3
7,8
0,166
Thr
8
5,5
8,8
6,25
3,4
7,8
0,435
Glu
9
6,2
8,8
0,704
3,2
7,8
0,41
Tyr
10
7,5
8,8
0,852
3,1
7,8
0,397
Met
Tabla 2. Cromatograma bidimensional tipo desarrollado en las 2 fases móviles.
Tabla 3. Cromatograma bidimensional con el jugo de jitomate desarrollado en las dos fases móviles.No. De mancha
1ª fase móvil
2ª fase móvil

Frente del soluto
Frente del disolvente
Rf
Frente del soluto
Frente del disolvente
Rf
1
3,4
7,9
0,43
0,4
7,8
0,051
2
3,6
7,9
0,455
1,5
7,8
0,192
3
5,1
7,9
0,645
0,2
7,8
0,025
4
5,3
7,9
0,67
4,3
7,8
0,551
5
6,2
7,9
0,784
1,2
7,8
0,153
6
7,8
7,9
0,987
7
7,8
0,897

Tabla 4. Cromatograma bidimensionalcon jugo de jitomate desarrollado en las dos fases móviles.
No. De manca
Rf en la 1a fase móvil
Rf en la 2a fase móvil
aminoácido correspondiente
1
0,43
0,051
Lys
2
0,455
0,192
Gly
3
0,645
0,025
His
4
0,67
0,551
Glu
5
0,784
0,153
Thr
6
0,987
0,897
Pro







PREGUNTAS EXTRAS
1.- Investiga en la literatura los aminoácidos que contiene el jugo de jitomate.Nutriente
Cantidad
Nutriente
Cantidad
Ácido aspártico
113 mg.
Leucina
28 mg.
Ácido glutámico
314 mg.
Lisina
27 mg.
Alanina
24 mg.
Metionina
7 mg.
Arginina
17 mg.
Prolina
15 mg.
Cistina
0,93 mg.
Serina
26 mg.
Fenilalanina
22 mg.
Tirosina
11 mg.
Glicina
17 mg.
Treonina
21 mg.
Hidroxiprolina
0 mg.
Triptofano
6 mg.
Histidina
12 mg.
Valina
21 mg.
Isoleucina
21...