cromatografia de capa fina

PRÁCTICA 1. CROMATOGRAFÍA DE CAPA FINA BIDIMENSIONAL

OBJETIVOS
Adquirir experiencia en la realización de cromatografía de capa fina bidimensional, reconociéndola como uno de los métodos de cromatográficos más simples, pero de gran utilidad.
Separar los componentes de una muestra conocida (pimentón), con gran contenido de pigmentos para observar el comportamiento de este métodocromatográfico.

INTRODUCCIÓN
La cromatografía puede definirse como una técnica que separa una mezcla de solutos basada en la velocidad de desplazamiento diferencial de los mismos, que se establece al ser arrastrados por una fase móvil (líquida o gaseosa) a través de un lecho cromatográfico que contiene la fase estacionaria, la cual puede ser líquida o sólida. Las propiedades de los componentes de unamezcla determinan su movilidad entre sí y con respecto a la fase móvil. La base de la separación cromatográfica será, por tanto, la diferencia en la migración de los mismos.
En la Cromatografía en capa delgada o capa fina bidimensional, la muestra para análisis se aplica por medio de un tubo capilar en la superficie de una capa fina adsorbente en forma de banda, punto o mancha y es adsorbida en lasuperficie por la acción de fuerzas electrostáticas (Fuerzas de Van der Waals, puentes de hidrogeno, efectos inductivos, etc.). Los adsorbentes más  utilizados son gel de silica, alúmina, tierra silícea, celulosa y poliamidas.

METODOLOGÍA
Con esta práctica se buscaba obtener una separación de los pigmento presentes en el pimentón, utilizando cromatografía de capa fina bidimensional.Inicialmente se elaboró un extracto etanólico de la muestra; macerando aproximadamente 5 g y colocándola en un erlenmeyer con etanol durante aproximadamente 24 horas; con el fin de obtener la concentración suficiente. Se prepararon dos soluciones:

Solución
% de heptano
% de acetato de etilo
% acetona
Volumen solución mL
1
20
80
0
25
2
20
72
8
25
Tabla 1. Soluciones (Nota: Lapolaridad de la solución 2 es mayor que la de la solución 1).

Las cuales fueron utilizadas como fase móvil durante el proceso. La fase estacionaria fue una lámina de capa fina de silícagel, la cual fue cortada en forma cuadrada, se trazó el frente del solvente y aproximadamente 0. 5 cm sobre el borde se colocó con ayuda de un capilar pequeñas cantidades de muestra, repetidamente en un mismo punto.Luego, en un vaso de precipitado con la solución 1 e impregnado con esta, se introdujo la lámina con la muestra tapándolo y se esperó hasta que el solvente tocó el frente antes marcado, los resultados observados fueron:

Figura 3. Primera fase de la cromatografía
Se dejó secar la lámina y girándola 90 grados se introdujo en un vaso que contenía la solución 2, se esperó a que la fase móvilllegara al frente de solvente; observando:


Figura 4. Cromatograma terminado

CÁLCULOS
La “manchas” (ver figura 4) representan a los componentes, la separación se da por migración diferencial, es decir que la fase móvil arrastra a las substancias más afines a ella, mientras la fase estacionaria retendrá a las más compatibles con ella.
El Rf es una forma de expresar la posición de uncompuesto sobre la placa cromatografía, a su vez ayuda a medir la retención y esta dado por:


Donde: Distancia recorrida desde el origen hasta el frente: 2.7 cm. A continuación se determinaran los Rf para cada una de las machas obtenidas en la práctica:












Nota: las medidas se toman hasta la mitad de la manchas.
No. pigmento
Distancia recorrida desde el origen por elcompuesto (cm)
Factor de retención (Rf )
1
0
0
2
0.3
0.111
3
0.4
0.148
4
0.5
0.185
5
0.6
0.222
6
0.7
0.259
7
0.8
0.296
8
1.0
0.370
9
1.4
0.518
10
1.9
0.704
11
2.2
0.815

Tabla 2. Rf obtenidos en los pigmentos
ANÁLISIS DE RESULTADO
De acuerdo a que lo semejante disuelve lo semejante, siendo la silicagel de carácter polar, que corresponde a la fase estacionaria; en...