Cromatografia de capa fina

CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA

1. HISTORIA

El botánico ruso Mikhail Tswett estableció las ventajas de la cromatografía y fué el primero en utilizar este término. Es recordado como el Padre de la Cromatografía.
Ismailov y Scraiber utilizaron láminas de vidrio para colocar capas muy delgadas de alúmina y luego aplicaron extractos vegetales, dando así la primera forma de Cromatografía de CapaFina. Egon Stanl (1956) dió el nombre de Cromatografía de Capa Fina. Estandarizó los procedimientos, equipos y adsorbentes dando un auge a la técnica simple, a bajo costo y eficiente.

2. DEFINICION
La cromatografía en capa fina, TLC (Thin layer chromatograhy) es una técnica cromatográfica. La fase estacionaria es una capa, uniforme, de un absorbente mantenido sobre una placa, la cual puedeser de vidrio, aluminio u otro soporte. Los requisitos son un absorbente (por ejemplo silica gel), placas, un dispositivo que mantenga las placas durante la extensión, otro para aplicar la capa de absorbente, y una cámara en la que se desarrollen las placas cubiertas.
La fase móvil es líquida y la fase estacionaria consiste en un sólido. La fase estacionaria será un componente polar y el eluyenteserá por lo general menos polar que la fase estacionaria, de forma que los componentes que se desplacen con mayor velocidad serán los menos polares.
Polaridad de los compuestos orgánicos en orden creciente:
Hidrocarburos < olefinas < fluor < cloro < nitro < aldehído
Aldehído < ester < alcohol < cetonas < aminas < ácidos < amidas

3. APLICACIÓN DE LASMUESTRAS

Los productos a examinar se disolverán, cuando sea posible, en un disolvente orgánico que tenga un punto de ebullición lo suficientemente bajo para que se evapore después de la aplicación, lo más común es usar acetona. Frecuentemente se emplean disoluciones al 1%, de manera que al aplicar 2 µl resulta en la carga 20 µg de producto sólido. Muchos reactivos de revelado llegan a detectar 0.1µg de material; por esto con esta carga puede llegarse a observar un 5% de impurezas.
Existen una gran variedad de micropipetas y microjeringuillas para realizar el proceso de siembra de la muestra a analizar. También pueden usarse tubos capilares. El proceso de siembra se realiza tocando con la punta del capilar (micropipeta, etc) sobre la placa preparada. Dejando una distancia al borde inferiorde un centímetro aproximadamente. El punto de aplicación de la muestra se denomina toque.
Una vez colocado el toque se deja secar para evaporar el disolvente, de forma que en la placa solo quedará la muestra a analizar.

4. ELECCIÓN DEL ELUYENTE

La elección del eluyente depende del componente que se va a separar y del material en que la separación se lleva a cabo.
Principales eluyentes enorden creciente de polaridad:
Eter de petróleo. Eter dietílico. Ciclohexano. Acetato de etilo. Tetracloruro de carbono.* Piridina. Benceno.* Etanol. Cloroformo.* Metanol. Diclorometano. Agua. Ácido acético.
* compuestos cancerígenos.
En la elección del eluyente influyen varios factores:
Precio. Pureza. No utilizar mezclas de eluyentes (reproducibilidad). No utilizar compuestos muyvolátiles. Evitar que contengan trazas de metales (catalizadores). La elección del eluyente se realiza de forma empírica. Hay que estudiar la polaridad del componente y probar con eluyentes cada vez menos polares.

a) Toque de la muestra sin aplicar ningún eluyente.
b) Aplicando un eluyente poco polar.
c) Aplicando un eluyente más polar.
Al aplicar en primer lugar eluyentes poco polares, podemosseguir utilizando la misma placa para aplicar otros eluyentes más polares, hasta dar con el más apropiado.
Otra técnica para realizar la elección del eluyente consiste en sembrar varias muestras distanciadas suficientemente, y aplicar con un tubo capilar distintos eluyentes sobre el centro de cada muestra. Esto permite desarrollar cada eluyente radialmente por capilaridad, de forma que se aprecie...