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CROMATOGRAFÍA
DE
INTERCAMBIO
IÓNICO

Hay tres tipos de Fases Estacionarias (Resinas):

I. Resinas de poliestireno
entrecruzadas

II. Resinas basadas en
Carbohidratos- (Carbohidratos
Poliméricos,Agarosa, dextrano, celulosa)

Especialmente usados en la
separación de
biomoleculas.

III. Soportes basados en la Sílice

CROMATOGRAFÍA DE INTERCAMBIO IÓNICO

CROMATOGRAFÍA DE INTERCAMBIO IÓNICOCROMATOGRAFÍA DE INTERCAMBIO IÓNICO

Tipos Frecuentes de Resinas

CROMATOGRAFÍA DE INTERCAMBIO IÓNICO

Resina aniónica de distintos tamaños

Mecanismo
Los iones de las
sustancias de la mezcla
desplazana los
contraiones de la
columna. A su vez, ellos
compiten con los iones
de la FM por los sitios
activos
n(resina—A-H+) + Bn+

[
H ] [B ]
k=
[H ] [B ]
+ n
+

n+

n

re

re
n+

(resina—A-)nBn+ + nH+[
H ]
k=
[H ]

+ n

+

K

re

Donde: K es la cte de distribución y k la de equilibrio

La fuerza del enlace de la muestra depende de:
– Magnitud de la carga
» Ley de Coulomb - F α q1q2/r2 3+ >2+ > 1+– Tamaño del ión hidratado (relacionado con la ecuación de Coulomb)

-Efecto del Amortiguador (Salino)
Los cationes/aniones de la fase móvil pueden desplazar a la
muestra de la columna
Todas las salesNO son iguales

–

Aniones: OH- < Cl- < NO3-

–

< citrate3Cationes: H+ < NH4+ < K+
< Mg2+ < Ca2+

–

Los polivalentes se sujetan
mas fuertemente a la
columna que los
monovalentes

CROMATOGRAFÍA DEINTERCAMBIO IÓNICO
Factores que afectan a la retención:
1. Fuerza Iónica

1
I = Σ(mi zi2 )
2

2. pH . Solo para intercambiadores, aniónicos o
catiónicos, débiles, ya que los fuertes están totalmentedisociados. Para aquellos se cumple:

pH (bases) = pK a − 1.5
pH (ácidos) = pK a + 1.5
3. Modificadores Orgánicos.

La elución en gradiente se realiza:
1. mediante cambios en la fuerza iónica
2. mediantecambios en el pH

GRADIENTE: aumentando la concentración de la fase móvil los iones
compiten cada vez mas favorablemente con la muestra por los sitios
activos cargados de la fase estacionaria...