Cromatografia de liquidos

CROMATOGRAFÍA DE LÍQUIDOS.
En cromatografía líquida, la fase móvil es un líquido que circula a través de una columna en la que está contenida la fase estacionaria. La fase móvil no sólo arrastra al analito, sino que existen interacciones intensas entre el analito y la fase móvil.
La retención cromatográfica es función de:
La fase móvil.
La fase estacionaria.
El analito.
Todas las especiesque pueden disolverse pueden separarse eligiendo la combinación adecuada de fase móvil y fase estacionaria.
• La cromatografía líquida se clasifica según el lecho cromatográfico:
Cromatografía Líquida Clásica: La columna es de vidrio y se usa para mezclas complejas.
Cromatografía de alta resolución o HPLC: La columna es de acero inoxidable. Va a ser objeto de estudio en este trabajo.
• La HPLCconsta de una columna de acero inoxidable de 10 30 cm de longitud, y un diámetro interno de 4 - 10 mm. Las partículas de la fase estacionara son de un tamaño aproximado a las 5 - 10m.
Cabe destacar que separa con gran eficacia, identifica los compuestos separados por la columna y además lo cuantifica por su altura o área de picos en el cromatograma.
3.1.- Componentes básicos en un equipo deHPLC:
De forma esquemática los componentes básicos son:
Sistema de suministro, Inyector Columna Detector Registrador
Bombeo y conducciones
de la fase móvil
En esta figura pueden observarse con más detalle:

Fig. 5: Esquema de un aparato de HPLC.
SISTEMA SUMINISTRO DE LA FASE MÓVIL:
Se trata de un reservorio o varios reservorios para los disolventes. Sirve para desgasificar y eliminarpartículas en suspensión de los disolventes que interfieren formando burbujas en los sistemas de detección.
SISTEMA DE BOMBEO DE LA FASE MÓVIL:
Se usan bombas para impulsar a la fase móvil y deben cumplir los siguientes requisitos:
Deben vencer altas presiones.
Proporcionar caudales estables entre 0,1 y 10mL/min.
Deben estar libres de pulsaciones y tener volúmenes muertos pequeños.
Deben estarconstruidas de materiales resistentes a la presión y a las agresiones químicas.
Fácil manejo y mantenimiento.
Se utilizan tres tipos de bombas :
Bombas recíprocas
Bombas de desplazamiento
Bombas neumáticas.
INYECTORES:
Son los encargados de introducir la muestra en la cabeza de la columna de forma reproducible y adecuada.
Hay dos tipos de inyectores
Septum: Inyecta la muestra mediante unajeringa. Se usa poco y no permite mucha presión.
Bucle de muestreo: Este dispositivo normalmente se encuentra integrado en el equipo cromatográfico y existen bucles intercambiables que permiten la elección de tamaños de muestra.
PRECOLUMNAS
Se colocan delante de la columna para eliminar la materia en suspensión y los contaminantes de los disolventes. La composición del relleno debe ser semejanteal de la columna. Aunque el tamaño de partícula es mayor para minimizar la caída de presión. En muchas ocasiones se usan para aumentar la vida de la columna.
COLUMNA:
Normalmente son de acero inoxidable de diámetro interno uniforme aunque en ocasiones se encuentran tubos de vidrio de paredes resistentes.
La mayoría de las columnas de cromatografía de líquidos tienen una longitud entre 10 y 30cm. Generalmente son rectas y se pueden alargar, si es necesario, acoplando dos o más columnas. El diámetro interno de las columnas es a menudo de 4 a 10 mm y los tamaños de las partículas de los rellenos más comunes son 3, 5 y 10m.
Los empaquetados más comunes son de partículas de sílice pero también se usa la alúmina, polímeros porosos y resinas de intercambio iónico.
La columna más utilizadaes la de 25 cm de longitud y 4,6 mm de diámetro interno, empaquetada con partículas de 5 m. Estas columnas tienen de 40.000 a 60.000 platos/metro.
Desde hace poco, se han empezado a fabricar columnas de alta resolución más rápidas, las cuales tienen menores dimensiones que las anteriormente descritas. Estas columnas pueden tener diámetros internos que oscilan entre 1 y 4,6 mm y se rellenan...