Cromatografia de liquidos

3.CROMATOGRAFÍA DE LÍQUIDOSESPECTROMETRÍA DE MASAS

Cromatografía de líquidos-espectrometría de masas

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3.1. INTRODUCCIÓN GENERAL
Como se ha expuesto anteriormente en la presente memoria, la cromatografía de líquidos es la técnica de separación más comunmente utilizada para llevar a cabo la separación de las HAs y su determinación en matrices alimentarias, ya que a diferencia de lacromatografía de gases no se requiere una etapa de derivatización previa a su inyección en el sistema cromatográfico. Tal y como se comentó en el Apartado 1.2.2.2, si se combina la cromatografía de líquidos con la espectrometría de masas el resultado es una metodología analítica de elevada selectividad y sensibilidad. Por este motivo, cada vez son más numerosas las publicaciones relacionadas conlas aminas heterocíclicas que aplican técnicas basadas en el acoplamiento LC-MS. Los primeros trabajos que utilizaron métodos LC-MS para analizar HAs emplearon fuentes de ionización por termopulverización (TSP) (Edmons et al., 1986). Posteriormente y siguiendo la evolución de las técnicas de ionización en espectrometría de masas acoplada a la cromatografía de líquidos, el TSP fue desplazado por lastécnicas de ionización a presión atmosférica (API), que incluyen la electropulverización o electrospray (ESI) (Johansson et al., 1995) y la ionización química a presión atmosférica (APCI) (Holder et al., 1997). En la fuente ESI, desarrollada a mediados de los años 80 (Yamashita et al., 1984; Aleksandrov et al., 1985), la muestra líquida se introduce a través de un capilar al que se aplica unelevado potencial (± 3-5 kV), lo que permite producir un spray de microgotas cargadas, las cuales debido a repulsiones electrostáticas se dividen hasta provocar la desolvatación y evaporación de los iones. La fuente ESI trabaja a flujos entre 0,5 y 10 µL min-1, aunque se pueden aumentar hasta 300-400 µL min-1 utilizando el denominado ionspray (ISP), una variante del electrospray en la cual la formacióndel aerosol y la desolvatación están facilitadas por una corriente coaxial de gas. La electropulverización es una técnica de ionización suave, de manera que los iones producidos son principalmente los derivados de la incorporación o cesión de uno o varios protones a las moléculas, aunque también se pueden originar iones correspondientes a aductos con otras especies presentes en la fase móvil. Enlas fuentes de APCI, desarrolladas a mediados de los años 70 (Horning et al., 1973), la fase móvil se introduce a través de una cámara de vaporización cilíndrica que se encuentra a elevada temperatura, lo que provoca la evaporación del efluente

Capítulo 3

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cromatográfico. La ionización se induce aplicando un elevado voltaje (± 3-5 kV) a un electrodo en forma de aguja, lo que produceuna corriente de hasta 10 µA. Esta corriente eléctrica origina un plasma de iones de la fase móvil que provoca un proceso de ionización química. La ionización química a presión atmosférica es una técnica de ionización suave, aunque en algunos casos además de los iones correspondientes a la molécula protonada o desprotonada pueden aparecer fragmentos en el espectro. En la Tabla 3.1 se resumen lasprincipales características de las fuentes API. La principal diferencia entre las dos fuentes de ionización radica en el mecanismo de ionización. En ESI, los iones preformados en fase líquida son a continuación desolvatados y evaporados. En cambio, en APCI la ionización se produce en fase gas debido a reacciones ion-molécula entre el plasma generado a partir de la fase móvil y los analitos. Otradiferencia importante está relacionada con el caudal de fase móvil óptimo. Mientras que ESI funciona óptimamente a caudales bajos, el APCI permite trabajar sin pérdida de sensibilidad a caudales de 1 mL min-1. Además, esta última técnica de ionización se ve menos afectada por componentes iónicos presentes en la matriz, aunque la elevada temperatura de trabajo del APCI limita su aplicación a...