Cromatografia de particion y de adsorcion

Trabajo Práctico N° 3
Cromatografía

Introducción Teórica:

La cromatografía es un método físico para la remoción selectiva de los componentes de una mezcla, basado en la distribución de la misma en dos fases, una móvil y una estacionaria. La fase estacionaria es un lecho de extensa superficie (sólida o líquida) a través de la cual pasa la fase móvil (líquida o gaseosa). La remoción seproduce de acuerdo a la interacción de las distintas mezclas con la fase estacionaria.

Existen diferentes tipos de cromatografías de acuerdo a la fase móvil utilizada, como por ejemplo las cromatografías de partición y de adsorción que serán utilizadas en este trabajo (se detallan en el cuestionario). Además existen diferentes mecanismos para llevar a cabo cada una de ellas. Sin importar elmétodo o la cromatografía utilizada hay ciertos pasos inherentes al proceso: el armado de la placa o la columna, la siembra del soluto o mezcla, el desarrollo, el revelado y la elución.

Parte Experimental:

Experiencia 1: Cromatografía de partición en papel

Diagrama de Flujo:

1°) Cortar el papel de filtro (radio 6 u 11 cm), realizarle un orificio en el centro y marcar un radio de 0,5 cmalrededor del mismo. Esta será la fase estacionaria

2°) Pasar un pabilo de algodón por el orificio (absorberá el solvente).

3°) Preparación del solvente: 2 partes de etanol, 1 parte de etanol y 4 partes de agua. Fase móvil

4°) Colocación del solvente en una caja de petri cerrada, para producir una acumulación de gases del solvente.

5°) Preparación de la muestra: - Obtención deminipipetas (a partir de capilares).

- Colocación de una gota de soluto en el radio previamente

marcado.

- Señalar las ubicaciones iniciales de las muestras.

6°) Colocar el papel de filtro en la caja de petri de manera tal que el solvente este en contacto solo con el pabilo y no con el papel. Colocar la tapa para mantener laconcentración.

7°) Esperar aproximadamente 20 minutos hasta que el solvente se desplace por el papel de filtro (sin que llegué al borde).

8°) Una vez retirado el papel, marcar las posiciones del solvente (antes de que se evapore) y de los solutos.

Observaciones y conclusiones:

Para esta experiencia los solutos que utilizamos fueron Rodamina B (color fucsia), Azul de Metileno (color azul)y Fluoresceina (color amarillo), los cuales fueron aplicados al papel mediante mini-pipetas obtenidas por la manipulación de capilares sobre llama.

El solvente utilizado fue una mezcla de tres compuestos muy polares, sin embargo el papel de filtro, compuesto por moléculas de glucosa, contiene entre ellas un gran número de moléculas de agua, por lo que la fase estacionaria es la más polar, y,en comparación, la fase móvil es no polar.

Muestra tiempo 2 min

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Muestra tiempo 22 minutos

Una vez que la fase móvil se desplazó una distancia considerable sacamos el papel, marcamos las posiciones tanto del solvente como los colorantes y los medimos. De esta forma obtuvimos las razones de radio para cada compuesto. Las razones de radio son la relación entre la distancia recorridadel soluto y la del solvente:

R[pic]

Entonces:

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A través de la relación se observa que el azul de metileno es el más afín con el papel de filtro, ya que atraído con mayor fuerza, por lo tanto es el más polar. De la misma manera se puede decir que la Rodamina B es la menos polar, pues es más afín con el solvente que con elpapel altamente polar. En el caso de la Fluoresceina, si bien fue desplazada una distancia importante, las fuerzas ejercidas por las moléculas de agua resultaron, al cabo de un tiempo, ser más fuertes que las ejercidas por el solvente, por lo que se detuvo.

Experiencia 2: Cromatografía de adsorción en capa fina

Diagrama de flujo:

1° Parte: Extracción de pigmentos de hojas verdes

1°) Se...