Cromatografia-electroforesis

Laboratorio de Bioquímica Avanzada. Tecnología Médica. Universidad Santo Tomás. Sede Viña del Mar. Informe Nº 3 Métodos de Separación Nombres: Alicia Córdoba Rocío Tapia 1. Objetivos:
   Conocer y utilizar técnicas cromatográficas y electroforéticas. Conocer, comprender y aplicar los tipos fundamentales de cálculos utilizados en la separación por medio de técnicas cromatográficas yelectroforéticas. Separar e identificar proteínas de plasma sanguíneo ocupando técnicas electroforéticas.

2. Fundamento de las Técnicas:
CROMATOGRAFÍA: Método físico de separación para la caracterización de mezclas complejas, la cual tiene aplicación en todas las ramas de la ciencia y la física. Es un conjunto de técnicas basadas en el principio de retención selectiva, cuyo objetivo es separar losdistintos componentes de una mezcla, permitiendo identificar y determinar las cantidades de dichos componentes. Las técnicas cromatográficas son muy variadas, pero en todas ellas hay una fase móvil que consiste en un fluido (gas, líquido o fluido supercrítico) que arrastra a la muestra a través de una fase estacionaria que se trata de un sólido o un líquido fijado en un sólido. Los componentes de lamezcla interaccionan en distinta forma con la fase estacionaria. De este modo, los componentes atraviesan la fase estacionaria a distintas velocidades y se van separando. La cromatografía puede cumplir dos funciones básicas que no se excluyen mutuamente:  Separar los componentes de la mezcla, para obtenerlos más puros y que puedan ser usados posteriormente.  Medir la proporción de los componentesde la mezcla. Técnicas cromatográficas: a) Cromatografía de Reparto b) Cromatografía de Adsorción c) Cromatografía de Intercambio Iónico

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d) Cromatografía de Exclusión e) Cromatografía de Afinidad En este practico se trabajó con “Cromatografía de Reparto” la cual se basa en la separación de una mezcla de solutos entre la fase móvil y la estacionaria soportada sobre un sólido adecuado, deacuerdo a las distintas solubilidades de estos solutos en ambas fases. Un tipo de esta Cromatografía es la: Cromo. en papel  Se utiliza para la separación de cantidades mínimas de soluto y también como criterio de pureza. Se basa en la diferente velocidad con que se mueven cada soluto a través de una fase estacionaria que es el agua retenida sobre un soporte sólido e inerte (celulosa), arrastradopor un disolvente en movimiento. ELECTROFORÉSIS: Técnica para la separación de moléculas según la movilidad de estas en un campo eléctrico. La separación puede realizarse sobre la superficie hidratada de un soporte sólido (p. ej., electroforesis en papel o en acetato de celulosa), o bien a través de una matriz porosa (electroforesis en gel), o en disolución (electroforesis libre). Dependiendo de latécnica que se use, la separación obedece en distinta medida a la carga eléctrica de las moléculas y a su masa. Para caracterizar una molécula se determina la velocidad a la que esta se mueve en un campo eléctrico y se utiliza para determinar, en el caso de proteínas, la masa molecular o para detectar cambios de aminoácidos y separar cuantitativamente distintas especies moleculares.Electroforesis en Gel: a) Electroforesis No Desnaturalizante b) Electroforesis Desnaturalizante c) Isoelectroenfoque d) Electroforesis Bidimensional e) Electroforesis Capilar

Electroforesis Proteínas Séricas  Una de las técnicas más sencillas para la cuantificación
de proteínas es su separación en un campo eléctrico mediante la técnica de electroforesis. El proteinograma es una técnica analítica capaz deseparar en 5 fracciones grupos de proteínas específicas. La cantidad de estas proteínas proporciona una valiosa información sobre distintas alteraciones, ya que ciertas enfermedades tienen patrones determinados en el proteinograma. La mayoría de las proteínas plasmáticas se sintetizan en el hígado; la principal excepción son las inmunoglobulinas que son producidas por las células plasmáticas....