Cromatografia en capa fina

I. Introducción:

Los métodos cromatográficos permiten fraccionar los componentes de una mezcla, ya que dependen de la migración selectiva y diferencial de los solutos a través de un sistema de dos fases: Una sólida y otra fluida. La fase sólida se llama adsorbente, y es estacionario; se denomina adsorción a la capacidad del adsorbente para detener o concentrar selectivamente, sobre susuperficie, gases, líquidos o sólidos arrastrados por la fase fluida móvil. La cromatografía es muy empleada para obtener y purificar antibióticos, medicinas y productos industriales.
La cromatografía en capa fina permite identificar componentes en productos comerciales, líquidos, biológicos, minerales y tejidos.
Cuando los materiales que se trata de identificar son incoloros, se efectúa lacromatografía y una vez que el disolvente (fase móvil) ha alcanzado una determinada a altura, se detiene la operación se seca la capa fina y finalmente se cubre con una dispersión muy fina de un reactivo que dé reacciones colorida con el materia a identificar, los que parecen en forma de manchas.
La longitud recorrida por un compuesto, desde el origen a su posición final, dividida éntrela recorrida por elfrente del disolvente, desde el origen de la mezcla hasta la altura máxima alcanzada por el frente del disolvente, se denomina RF, siendo una constante característica de cada compuesto siempre que efectúa la determinación con la misma fase móvil, adsorbente en la capa delgada y condiciones de operación.
Eluyentes más comunes para cromatografía en capa fina
- éter de petróleo -cloruro de metileno
- n-hexano - acetato de etilo
- ciclo hexano - acetona
- tolueno - ISO-propanol
- dietil-éter - etanol
- t-butil-éter - metanol
- cloroformo - ácido acético

Reveladores más comunes para cromatografía en capa fina
Las manchas de color son,por supuesto, inmediatamente visibles; las incoloras pueden revelarse mediante:
a) Luz UV: si la sustancia absorbe luz ultravioleta, se puede usar una fase estacionaria impregnada con un indicador fluorescente (F254 ó F366), el número que aparece como subíndice nos indica la longitud de onda de excitación del indicador utilizado.
b) La introducción de la placa en vapores de yodo.
c) El rocíocon una solución de agua/H2SO4 1:1 (dentro de un compartimiento especialmente protegido y bajo una campana de extracción de gases). Después calentar intensamente, por ejemplo, con un mechero. Hasta carbonizar los compuestos.

Adsorbentes más comunes para cromatografía en capa fina.
a) Gel de sílice (se utiliza en el 80% de las separaciones)
b) Óxido de Aluminio ó Alúmina (ácida, neutra óbásica)
c) Celulosa (Nativa o micro-cristalina)
d) Poliamidas

Para la selección del adsorbente deber tomar las siguientes consideraciones:
a) Polaridad
b) Tamaño de partícula
c) Diámetro
d) Área Superficial
e) Homogeneidad
f) Pureza

II. Desarrollo Experimental
Preparación y manejo de las placas delgadas.
-La fase estacionaria se obtiene tomando el portaobjetos por una esquinainmergiéndolo dentro de una suspensión de gel de silica, sacando la placa, limpiando una de sus caras, mientras que en la otra se deja evaporar el disolvente para que quede la fase estacionaria formando una capa delgada.
- una vez seca traza una línea de origen de 1.5 o 2 cm de un extremo de la placa. En la línea de origen se colocan una o dos manchas (de 0.3 a 0.5 cm) o la cantidad señalada de dela solución que se desea cromatografiar. La aplicación se hace con capilares.
- La placa seca se introduce en un frasco de boca ancha y de 12 cm de altura aproximadamente en la cual se ha colocado un disolvente de un centímetro de altura.
Observe la figura 1.
-Marca la altura máxima alcanzada por el disolvente.
-Se determinan las manchas coloridas y se marca su posición

Figura 1....