cromatografia en papel de aminoacidos








FACULTAD DE CIENCIAS QUIMICAS

Alumnas: Aguilar Hernández María Estefanía
Espinoza Canela Yazmin
Rosas Andrade Jessica

Laboratorio de Bioquimica 1

Licenciatura en Farmacia

Profesor Armando Mena Contle



Teoría: Las mezclas de aminoácidos pueden separarse en placas de capa fina de gel de sílica, empleando como fase móvil butano:agua:ácido acético (4:1:1). Lasmanchas de los aminoácidos pueden detectarse  sobre la placa desarrollada, si después de secarla se asperja con una solución de ninhidrina.
Los aminoácidos aparecen como manchas púpura sobre un fondo ligéramente amarillento. Sin embargo, la prolina (que no pruduce amonio libre al reaccionar con ninhidrina) genera una mancha de color amarillo obscuro.
Este método, aunque no es muy sensible, se empleócon frecuencia en los primeros estudios de la composición de las proteínas. En la actualidad ha sido desplazado por la cromatografía líquida de alta resolución, ya que esta última es más confiable para la cuantificación y tiene mayor sensibilidad si los aminoácidos se detectan por fluorescencia.
Sin embargo, la cromatografía de capa fina se sigue empleando para determinar fosfoaminoácidos, yaque de esta manera es posible identificar si una determinada fosfoproteína, se encuentra fosforilada en serina, treonina o tirosina. Para ello, la proteína debe degradarse hasta liberar los aminoácidos que la componen y luego esto se separan en una placa de gel de sílica. La placa se gira 90o y se desarrolla con un segundo sistema de solventes. Los fosfoaminoácidos pueden revelarse con un reactivode ácido fosfomolíbdico para permitir su identificación. Los sistemas en los que las plzcas se desarrollan en ambas direcciones (en este caso se aplica sólo una muestra por placa) se conocen como TLC bidimensional.

-Principios Generales:
Cromatografia en papel:
La separación de mezclas de moléculas mediante la cromatografía de capa fina se basa en el principio del reparto entre dos fases.  Engeneral, una cromatografía se realiza permitiendo que la mezcla de moléculas que se desea separar (muestra) interaccione con un medio o matriz de soporte que se denomina fase estacionaria. Un segundo medio  (la fase móvil) que es inmicible con la fase estacionaria se hace fluir a través de ésta para "lavar"  (eluír) a las moléculas en la muestra. Debido a que las distintas moléculas en la muestrapresentan diferente coeficiente de reparto, la fase móvil "lavará" a los distintos componentes con diferente eficiencia, de modo que aquellos que "prefieren disolverse" en la fase móvil serán eluídos más rápido que los que sean preferencialmente solubles en la fase estacionaria.
Aminoácidos:
Un aminoácido es una molécula orgánica con un grupo amino (-NH2) y un grupo carboxilo (-COOH). Losaminoácidos más frecuentes y de mayor interés son aquellos que forman parte de las proteínas. Dos aminoácidos se combinan en una reacción de condensación entre el grupo amino de uno y el carboxilo del otro, liberándose una molécula de agua y formando un enlace amida que se denomina enlace peptídico; estos dos "residuos" de aminoácido forman un dipéptido. Si se une un tercer aminoácido se formaun tripéptido y así, sucesivamente, hasta formar un polipéptido. Esta reacción tiene lugar de manera natural dentro de las células, en los ribosomas.
Leucina:
La leucina (abreviada Leu o L) es uno de los veinte aminoácidos que utilizan las células para sintetizar proteínas. Está codificada en el ARN mensajero como UUA, UUG, CUU, CUC, CUA o CUG. Su cadena lateral es no polar, un grupo isobutilo(2-metilpropilo). Es uno de los aminoácidos esenciales. Como un suplemento en la dieta, se ha descubierto que la leucina reduce la degradación del tejido muscular incrementando la síntesis de proteínas musculares en ratas viejas.3 La leucina se usa en el hígado, tejido adiposo, y tejido muscular. En tejido adiposo y muscular, se usa para la formación de esteroles, y solo el uso en estos dos tejidos es...