Cromatografia intercambio ionico

CROMATOGRAFÍA DE INTERCAMBIO IÓNICO

Hay tres tipos de Fases Estacionarias (Resinas):

I. Resinas de poliestireno entrecruzadas

II. Resinas basadas en Carbohidratos- (CarbohidratosPoliméricos, Agarosa, dextrano, celulosa)

Especialmente usados en la separación de biomoleculas.

III. Soportes basados en la Sílice

CROMATOGRAFÍA DE INTERCAMBIO IÓNICO

CROMATOGRAFÍA DE INTERCAMBIOIÓNICO

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Tipos Frecuentes de Resinas

CROMATOGRAFÍA DE INTERCAMBIO IÓNICO

Resina aniónica de distintos tamaños

Mecanismo
Los iones de lassustancias de la mezcla desplazan a los contraiones de la columna. A su vez, ellos compiten con los iones de la FM por los sitios activos n(resina—A-H+) + Bn+ (resina—A-)nBn+ + nH+

[H ] [B ] k= [H ] [B ]+ n + n+ n re n+ re

[H ] k= [H ]
+

+ n

K

re

Donde: K es la cte de distribución y k la de equilibrio

La fuerza del enlace de la muestra depende de:
– Magnitud de la carga » Ley deCoulomb - F α q1q2/r2 3+ >2+ > 1+ – Tamaño del ión hidratado (relacionado con la ecuación de Coulomb)

-Efecto del Amortiguador (Salino)
Los cationes/aniones de la fase móvil pueden desplazar a lamuestra de la columna
Todas las sales NO son iguales

– – –

Aniones: OH- < Cl- < NO3-

< citrate3Cationes: H+ < NH4+ < K+ < Mg2+ < Ca2+
Los polivalentes se sujetan mas fuertemente a lacolumna que los monovalentes

CROMATOGRAFÍA DE INTERCAMBIO IÓNICO Factores que afectan a la retención:
1. Fuerza Iónica

1 I = Σ(mi zi2 ) 2

2. pH . Solo para intercambiadores, aniónicos ocatiónicos, débiles, ya que los fuertes están totalmente disociados. Para aquellos se cumple:

pH (bases) = pK a − 1.5 pH (ácidos) = pK a + 1.5
3. Modificadores Orgánicos.

La elución en gradiente serealiza: 1. mediante cambios en la fuerza iónica
2. mediante cambios en el pH

GRADIENTE: aumentando la concentración de la fase móvil los iones compiten cada vez mas favorablemente con la muestra...