Cromatografia Liquida De Alta Performance (Hplc)

CROMATOGRAFIA LIQUIDA DE ALTA PERFORMANCE (HPLC)


INTRODUCCION PAG. 03
ANTECEDENTES PAG.04
EL PROCESO CROMATOGRAFICO PAG.05
• CLASIFICACION DE LA CROMATOGRAFIA LIQUIDA PAG.05
 Cromatografía de adsorción (líquido-sólido) PAG.06
 Cromatografía de reparto/adsorción (fases ligadas químicamente) PAG.06
 Cromatografía de intercambio iónico PAG.06
 Cromatografía de exclusión molecularPAG.06
INSTRUMENTACION PAG.06
SISTEMA DE SUMINISTRO DE LA FASE MOVIL PAG.07
• La bomba PAG.09
• Tipos de bombas PAG.09
SISTEMAS DE MEZCLAS DE LA FASE MOVIL PAG.11
• Mezclado a alta presión PAG.12
• Mezclado a baja presión PAG.12
SISTEMAS DE INYECCION PAG.13
• Inyectores de jeringa PAG.14
• Inyectores de válvula PAG.14
CONDUCCIONES Y CONEXIONES PAG.15
DETECTORES PAG.16
• Detector deíndice de refracción PAG.19
• Detector de ultravioleta visible PAG.19
• Detectores de fluorescencia PAG.20
EL DETECTOR PAG.20
• Detectores electroquímicos PAG.23
• Detector de conductibilidad electrolítica PAG.23
LA COLUMNA PAG.25
• Diámetro de columna PAG.27
• Longitud de la columna PAG.27
• Conexiones PAG.27
• Relleno PAG.28
• Tamaño de partícula PAG.29
ELECCION DE LA COLUMNA YLA FASE MOVIL PAG.31
CROMATOGRAFIA DE ABSORCION PAG.32
CROMATOGRAFIA CON FASES LIGADAS PAG.35
CROMATOGRAFIA DE INTERCAMBIO IONICO PAG.40
CROMATOGRAFIA DE EXCLUSION MOLECULAR PAG.43
ANEXOS PAG.46
BIBLIOGRAFÍA PAG.51








Las primeras separaciones, con resultados positivos, por medio de métodos cromatográficosfueron llevadas a cabo por Tswett en el año 1.906; este botánico rusoconsiguió separar algunos pigmentos coloreados de hojas de plantas utilizando una columna de alúmina.
El desarrollo total de estas técnicas se produjo, no obstante, a partir del año 1931, en que
Kuhn y Lederer comenzaron a utilizarlas de manera sistemática. La cromatografía de líquidos
(CL) sufrió un relativo estancamiento a partir del año 1952 en que Martin y James impulsaron el desarrollo de lacromatografía de gases (CG), que acaparó los esfuerzos teóricos encaminados al conocimiento profundo de la cromatografía. No obstante, las limitaciones de la CG en cuanto al tipo de muestras analizables (volátiles o derivados volátiles de las mismas), originó, en la segunda década de los sesenta, una vuelta a considerar la CL cuyas limitaciones, en este sentido, se reducen a la posibilidad dedisolver la muestra, lo que le confiere un rango mucho más amplio de aplicación. Este hecho, junto con la aparición de fases estacionarias con diámetros de partícula mucho menores que los utilizados hasta entonces (3 a 25 um), que permiten obtener columnas de mayor eficacia, llevó a una utilización cada vez más extensa de este tipo de cromatografía.
La experiencia acumulada en el desarrollo de la CGpermitió también aplicar nuevos puntos de vista a la CL, para la que pronto se diseñaron sistemas de inyección, circulación del eluyente y detección, de eficacia comparable a la de los utilizados en CG, dando lugar a la moderna técnica de cromatografía líquida de alta eficacia (CLAE).




























En una primera etapa la cromatografia de líquidos serealizaba en columnas de vidrio con diámetros de 1 a 5 cm y longitudes de 50 a 500 cm. En este tipo de columnas realizó Tswett sus trabajos originales. Para asegurar unos caudales razonables, el diámetro de las partículas de la fase estacionaria sólida por lo general era de 150 a 200 μm. Incluso así, los caudales eran bajos, llegando a unas pocas décimas de mililitro por minuto. En consecuencia, lostiempos de separación eran largos -a menudo de varias horas-. Los intentos para acelerar el procedimiento clásico mediante la aplicación de vacío, o por bombeo no resultaron efectivos, puesto que el aumento de caudal originaba un aumento de la altura de plato por encima del mínimo característico que se observa en las gráficas de la altura de plato frente al caudal y el resultado era una menor...