cromatografia liquida

Cromatografu00eda de líquidos de alta
resolución (HPLC)
High Performance Liquid Chromatograhpy

reservorios

HPLC es una técnica completamente
establecida en el área farmacéutica,
medicinal,bioquímica, alimenticia y
agrícola, entre otras.

controlador
bomba
Detector
DAD

Inyector manual

Mezclador a baja presión
desgasificador

El acoplamiento HPLC-MS hizo de esta
técnicaanalítica una de las mas poderosas
en diferentes áreas de la química analítica
moderna tal como lo es la proteómica ,
metabolómica y peptidómica.

Nano-HPLC-MS de un extracto proteico de tejidoextraído de
una paciente con cáncer de pecho

Fase estacionaria en columnas de L=3 a 25 cm, 0,46 cm i.d., dp=2 a 5 μm,
cuidadosemente empacadas
alta performance o N (Hmin=5 a 10 μm)
Para noarruinar esta alta eficiencia se debe tener un sistema (inyectores,
volumenes extra-columna y detectores) también con alta performance.
dc entre 0,05-0,2 cm: columnas “microbore” aromáticos > clorados >sulfuros
> éteres > cetonas aldehídos ésteres
> alcoholes > amidas > aminas y ácidos carboxílicos.
NPLC:
La parte alquílica no contribuye a la retención en NPLC de adsorción (si
la partearomática de la molécula ya que es polarizable) y contribuye poco
en NPLC de partición.
El orden de elución por grupos sustituyentes mostrado anteriormente, es
aproximadamente el opuesto.

Separación demoléculas de PM < 2000
por cromatografía líquida
soluble en solventes orgánicos
soluble en
solventes poco
polares
(hexano, éteres,
benceno)
RPLC
(Partición)

soluble en agua

soluble ensolventes
polares
(-P:cloroformo,
acetato de etilo;
+P:metanol,
acetonitrilo)
-P
+P

NPLC
(Adsorción)

no iónico

iones

IEC
NPLC

(Partición)

moléculas orgánicas
iónicas oionizables
a) “Supresión iónica”
b) “Par iónico”

a) Supresión iónica: se trabaja a un pH de la fase móvil tal que
la molécula esta neutra.
b) Par iónico: requiere aditivos en la fase móvil que...