Cromatografia, Organica Unalm

CROMATOGRAFIA
I. Introducción:
La cromatografía, es la técnica de análisis químico utilizada para separar sustancias puras de mezclas complejas. Esta técnica depende del principio de adsorción selectiva (no confundir con absorción). La cromatografía fue descubierta por el botánico ruso, de origen italiano, Mijaíl Tswett en 1906, pero su uso no se generalizó hasta la década de 1930. Tswettseparó los pigmentos de las plantas (clorofila) vertiendo extracto de hojas verdes en éter de petróleo sobre una columna de carbonato de calcio en polvo en el interior de una probeta. A medida que la disolución va filtrándose por la columna, cada componente de la mezcla precipita a diferente velocidad, quedando la columna marcada por bandas horizontales de colores, denominadas cromatogramas. Cadabanda corresponde a un pigmento diferente.

II. Objetivos:
* Aplicar la técnica de cromatografía en columna para separar una mezcla de azul de metileno – anaranjado de metilo.
* Trabajar con placas de cromatografía en capa fina (c.c.f.) y de papel de dimensiones particularmente menores. Para el analizar la relación de frente. Y observar el comportamiento en esta técnicacromatografía.
* Conocer que es la electroforesis y sus aplicaciones en la biología.
* Diferenciar entre la c.c.f. y la de papel.
* Interpretar los valores de Rf

III. Materiales y reactivos:

Materiales:
* Columna cromatografíca.
* Cuba cromatográfica.
* Tubo de ensayo.
* Vaso de precipitado.
* Placa cromatográfica.
* Papel de filtro.
* Regla.
* Lápiz.Reactivos:
* Mezcla de anaranjado metilo-azul metileno.
* Metilo anaranjado.
* Metileno azul.
* Silicagel (SiO2) 5g.
* Etanol.
* Agua acidulada.
* Alúmina

IV. Procedimiento:
a) Cromatografía en columna: (cc) Separación de una mezcla de azul metileno – anaranjado de metilo.
1) Preparación de la columna: Introducir un trozo de algodón hasta el fondo de lacolumna. Luego preparar una solución con 20 ml de etanol y 5 g de silicagel (SiO2) y trabajar a la columna cromatográfica para formar una columna sólido como adsorbente y fase fija, abrir la llave y dejar escurrir el solvente hasta que esté 1 mm por encima de la superficie del adsorbente.
2) Siembra: Aplicar la muestra en la columna cromatográfica, abrir la llave hasta que todo el colorante seaadsorbido por la fase fija.
3) Elución: Adicionar más etanol (eluyente) hasta que se eluya el colorante más rápido; en este caso es el metil anaranjado, una vez desalojado completamente la primera componente, utilice un eluyente con más carácter polar. (agua acidulada) y eluir hasta desplazar por completo, el segundo componente azul metileno.

Notamos que la sustancia móvil está arrastrandoprimero anaranjado de metilo
b) CROMATOGRAFIA EN CAPA FINA:
1) Preparar la placa cromatográfica (en forma laminar y rectangular) formar como nivel de referencia a uno de los extremos de la lámina y con un lápiz trazar una línea 1.5 cm sobre el nivel de referencia.
2) Sembrar con un capilar unas 2 ó 3 gotas de la mezcla anaranjado de metilo-azul de metileno y en el otro azul metileno ydeje secar. Los puntos de siembra deben estar en el mismo nivel y equidistantes.
3) Introducir la placa en una cámara de desarrollo que contiene la fase móvil (propanol – acetona – agua).
4) Cuando el solvente está por llegar al extremo superior de la placa cromatográfica refile con su respectiva marca de solvente, y dejar secar y calcular el Rf con la siguiente expresión:

Rf =Altura recorrida por la muestra
Altura recorrida por el frente de solvente

IInicio de la cromatografia
IInicio de la cromatografia
Finalizando la cromatografia
Finalizando la cromatografia

c) CROMATOGRAFIA SOBRE PAPEL
1) 1.5 cm del extremo de la tira de papel de filtro trace una línea con un lápiz. (No se puede utilizar tintes, ya que estos también participarían en la...