Cromatografia Por Exclusion
Páginas: 6 (1298 palabras)
Publicado: 30 de agosto de 2011
INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL
ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLÓGICAS
DEPARTAMENTO DE BIOQUÍMICA
MÉTODOS DE ANÁLISIS
SEPARACIÓN DE GRUPOS USANDO CROMATOGRAFÍA POR EXCLUSIÓN
GRUPO: QV5C
MEXICO. D.F. OCTUBRE DE 2009
OBJETIVOS
• Determinar algunos parámetros que caracterizan al lecho cromatográfico.
• Efectuar la desalación de la albúminautilizando la técnica de cromatografía por exclusión.
PROCEDIMIENTO
Referido en el manual en la página 68-69
DATOS EXPERIMENTALES E INFORME
1.- DETERMINACION DEL VOLUMEN VACIO (Vo) DE LA COLUMNA
Tabla 1. Determinación del volumen vacío (Vo) de la columna
|Volumen de elución (ml) |A615 |
|3 |-0.006 |
|6|-0.009 |
|9 |-0.014 |
|12 |-0.015 |
|15 |-0.011 |
|18 |0.480 |
|21 |0.898 |
|24 |0.369 |
|27 |0.355 |
|30|-0.001 |
|33 |-0.008 |
|36 |-0.012 |
|39 |-0.011 |
[pic]
Grafica 1. Perfil de elución de la Dextrana Azul 2000
¿Cuál fue el volumen total de la columna?
Vt = (Πr*2)(h)
Vt = (3.1416) (0.95)*2 (23.5)
Vt = 66.6¿Cuál fue el volumen vacío (Vo) de la columna? ¿Qué importancia tiene determinarlo?
Vt = Vo + Vg + Vi
Vo = Vt - Vg - Vi
Vo = 66.6 - 12.15 - 33.45
Vo = 21
Determine el volumen que ocupa en la columna el líquido que se encuentra en el interior de la estructura del gel (Vi) y el volumen del gel solo (Vg).
1 g gel seco 5 ml de lecho cromatográfico
X 66.6 de lecho cromatográficoX = 13.32 g de gel seco
1 g gel seco 2.5 ml de agua
13.32 g de gel seco Y
Y = 33.3 ml de agua Y = Vi por lo tanto Vi = 33.3
Vt = Vo + Vg + Vi
Vg = Vt – Vo – Vi
Vg = 66.6 – 33.45 – 21
Vg = 12.15
2.- SEPARACIÓN DEL SULFATO DE AMONIO DE LA PROTEÍNA.
Tabla 1. Separación del Sulfatode Amonio y la Albúmina
|Volumen de elución |A280 |Masa del tuvo vacío|Masa del tubo con |(NH4)2SO4 (g) |(NH4)2SO4 (mg) |
|(ml) | |(g) |precipitado seco | | |
| | | |(g) | ||
|3 |0.000 |7.3984 |--- |--- |--- |
|6 |0.040 |6.0267 |--- |--- |--- |
|9 |0.031 |7.3174 |--- |--- |---|
|12 |0.037 |7.6872 |--- |--- |--- |
|15 |0.517 |7.9951 |--- |--- |--- |
|18 |0.617 |7.4542 |--- |--- |--- |
|21|0.145 |5.2802 |--- |--- |--- |
|24 |0.074 |7.5366 |7.5444 |0.0078 |7.8 |
|27 |0.077 |6.4582 |6.4763 |0.0186 |18.6 |
|30...
ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLÓGICAS
DEPARTAMENTO DE BIOQUÍMICA
MÉTODOS DE ANÁLISIS
SEPARACIÓN DE GRUPOS USANDO CROMATOGRAFÍA POR EXCLUSIÓN
GRUPO: QV5C
MEXICO. D.F. OCTUBRE DE 2009
OBJETIVOS
• Determinar algunos parámetros que caracterizan al lecho cromatográfico.
• Efectuar la desalación de la albúminautilizando la técnica de cromatografía por exclusión.
PROCEDIMIENTO
Referido en el manual en la página 68-69
DATOS EXPERIMENTALES E INFORME
1.- DETERMINACION DEL VOLUMEN VACIO (Vo) DE LA COLUMNA
Tabla 1. Determinación del volumen vacío (Vo) de la columna
|Volumen de elución (ml) |A615 |
|3 |-0.006 |
|6|-0.009 |
|9 |-0.014 |
|12 |-0.015 |
|15 |-0.011 |
|18 |0.480 |
|21 |0.898 |
|24 |0.369 |
|27 |0.355 |
|30|-0.001 |
|33 |-0.008 |
|36 |-0.012 |
|39 |-0.011 |
[pic]
Grafica 1. Perfil de elución de la Dextrana Azul 2000
¿Cuál fue el volumen total de la columna?
Vt = (Πr*2)(h)
Vt = (3.1416) (0.95)*2 (23.5)
Vt = 66.6¿Cuál fue el volumen vacío (Vo) de la columna? ¿Qué importancia tiene determinarlo?
Vt = Vo + Vg + Vi
Vo = Vt - Vg - Vi
Vo = 66.6 - 12.15 - 33.45
Vo = 21
Determine el volumen que ocupa en la columna el líquido que se encuentra en el interior de la estructura del gel (Vi) y el volumen del gel solo (Vg).
1 g gel seco 5 ml de lecho cromatográfico
X 66.6 de lecho cromatográficoX = 13.32 g de gel seco
1 g gel seco 2.5 ml de agua
13.32 g de gel seco Y
Y = 33.3 ml de agua Y = Vi por lo tanto Vi = 33.3
Vt = Vo + Vg + Vi
Vg = Vt – Vo – Vi
Vg = 66.6 – 33.45 – 21
Vg = 12.15
2.- SEPARACIÓN DEL SULFATO DE AMONIO DE LA PROTEÍNA.
Tabla 1. Separación del Sulfatode Amonio y la Albúmina
|Volumen de elución |A280 |Masa del tuvo vacío|Masa del tubo con |(NH4)2SO4 (g) |(NH4)2SO4 (mg) |
|(ml) | |(g) |precipitado seco | | |
| | | |(g) | ||
|3 |0.000 |7.3984 |--- |--- |--- |
|6 |0.040 |6.0267 |--- |--- |--- |
|9 |0.031 |7.3174 |--- |--- |---|
|12 |0.037 |7.6872 |--- |--- |--- |
|15 |0.517 |7.9951 |--- |--- |--- |
|18 |0.617 |7.4542 |--- |--- |--- |
|21|0.145 |5.2802 |--- |--- |--- |
|24 |0.074 |7.5366 |7.5444 |0.0078 |7.8 |
|27 |0.077 |6.4582 |6.4763 |0.0186 |18.6 |
|30...
Leer documento completo
Regístrate para leer el documento completo.