Cromatografia separacion de fluoresceina y azul de metileno

INSTITUTO POLITECNICO NACIONAL

ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLOGICAS
Laboratorio de: Métodos de Análisis

PRACTICA No. 4:
Separación de una mezcla de azul de metileno y fluoresceína usando cromatografía por adsorción.

GRUPO: 5QM1

SECCION: 3
PROFESOR:
Guillermo Castro Castillo

Alumno:
Romero Rodríguez Adriana Merali

FECHA DE ENTREGA: 22- Febrero- 2012RESULTADOS:
Tabla 1. Valores de Absorbancia obtenidos para la separación de fluoresceína y azul de metileno
Volumen de Elución | A 493 | A 668 |
3 | 0.004 | -0.004 |
6 | 1.977 | -0.003 |
9 | 0.771 | -0.001 |
12 | 0.092 | -0.005 |
15 | 0.009 | -0.007 |
18 | 0.009 | -0.007 |
21 | 0.001 | -0.006 |
24 | 0.003 | -0.008 |
27 | 0 | -0.009 |
30 | 0.001 | -0.009 |
33 | 0.102 | 0.036|
36 | 0.002 | -0.008 |
39 | 0.003 | 0.068 |
42 | 0.028 | 0.504 |
45 | 0.04 | 1.118 |
48 | 0.024 | 0.993 |
51 | -0.002 | 0.571 |
54 | -0.0016 | 0.278 |
57 | -0.024 | 0.101 |
60 | -0.025 | 0.038 |
63 | -0.026 | 0.02 |
66 | -0.028 | 0.014 |
69 | -0.029 | 0.03 |
72 | -0.023 | 0.08 |
75 | -0.016 | -0.009 |

2.- En el perfil de elución se observan claramente dos picos elprimero corresponde a la separación de fluoresceína ya que es el primer componente de la mezcla que se obtuvo, enseguida se observa un área en el que no se obtuvo ningún componente, excepto en el volumen 11 podemos observar un ligero pico esto se pudo deber a algún error provocado por el analista o en el mismo material, es decir que las absorbancia fueron casi constantes y finalmente se observaotro pico que corresponde al azul de metileno ya que es el colorante que se obtuvo al final.
3.- Especifique y defina los elementos del sistema cromatografico para esta separación.
La cromatografía por adsorción es del tipo líquido solido donde el líquido es la fase móvil y el sólido la fase estacionaria.
Fase móvil: Agua y Etanol Acido
Fase estacionaria: Alúmina alcalina
4.- Defina eltermino de adsorción y, empleando formulas, esquematice que fuerzas intermoleculares participan en el proceso de separación de los solutos.
La adsorción es el proceso mediante el cual un sólido poroso (a nivel microscópico) es capaz de retener partículas de un fluido en su superficie tras entrar en contacto con éste.
Fluoresceína
La fluoresceína es una sustancia muy polar debido a los electronesno compartidos, esta misma característica la presenta el agua, sabemos que lo polar disuelve lo polar por lo tanto la fluoresceína se disuelve en el agua.
•

Azul de metileno
El azul metileno eluye con el etanol acido (ambas sustancias no polares) porque entre estas dos se da una competencia por el adsorbente, ya que se sabe que adsorbentes con superficie activa alta adsorben a compuestos nopolares



Etanol acido
Azul de metileno

5.- Considerando las propiedades de solubilidad de los colorantes, indique que modificaciones haría para invertir el orden de elución.
Tendríamos que poner primero un componente no polar para asi propiciar la competencia con el azul de metileno al ser un compuesto no polar, posteriormente colocar un compuesto polar.
DISCUSION
A simple vista seobservo que el primer elemento en separarse fue lafluoresceína y posteriormente el azul de metileno. En el perfil de elución se observan dos elevaciones significativas:
•La primera se detecto a una longitud de onda de 493 nm que corresponde al agua, como sabemos el agua es una sustancia polar por lo tanto disolverá compuestos semejantes. En la mezcla de colorantes el componente mas polar es lafluoresceína, por lo tanto la elevación en el perfil de elución corresponde a la separación de este.
• Hay algunos volúmenes en los que a diferentes longitudes de onda la absorbancia es mínima lo cual indica que durante este lapso no se separo ningún componente de la mezcla.
•La alúmina (fase estacionaria) tiene una superficie activa alta, por lo cual adsorberá mejor a compuestos no polares;...