Cromatografia Y Electroforesis De Aminoacidos En Papel

Trabajo práctico de laboratorio nº1:
CROMATOGRAFIA Y ELECTROFORESIS DE AMINOACIDOS EN PAPEL
Química Biológica 2012

ALUMNA: Sofía Velázquez Santillán

1-RESUMEN DEL TRABAJO PRACTICO
En las dos experiencias que a continuación se detallarán se hizo uso de dos procedimientos: a)-Cromatografía y b)-Electroforesis sobre papel .Se procedió a analizar cuál es el comportamiento de los sistemasmontados para las técnicas mencionadas. En la primera pudo determinarse a partir de la afinidad que tres aminoácidos tenían con la fase móvil y la estacionaria, la identidad de una muestra problema formada por una mezcla de dos de estos; por comparación de los coeficientes de retardo después del análisis se concluyo que la muestra estaba formada por Acido Glutámico y Alanina.En el caso de laexperiencia -b) También se realizo la siembra de tres aminoácidos diferentes y de una muestra problema formada por una mezcla de dos de estos. La identidad de la muestra pudo determinarse a partir de la comparación entre la posición la las manchas visualizadas para cada aminoácido, resultando la muestra estar formada por Acido Glutámico y Valina.

2-INTRODUCCIÓN
Los aminoácidos presentan propiedadesiónicas y según el pH del medio, su carga neta varia. A fin de separarlos e identificarlos se aplicaran las siguientes técnicas:
a)- Cromatografía: Basada en la afinidad (según la polaridad) de un soluto por la fase móvil o la estacionaria. En el caso de la cromatografía en papel se trata de cromatografía plana. Aquí la celulosa es un soporte y a medida que ocurre la corrida cromatográfica lossolutos se distribuyen entre la fase estacionaria inmovilizada por el soporte de papel (agua) y la fase móvil (solvente en desarrollo).Como tanto la fase móvil como la estacionaria están en fase líquida se denomina Cromatografía líquida-líquida.
b)-Electroforesis: Basada en el movimiento de moléculas cargadas cuando se aplica un campo eléctrico .Cada molécula se mueve hacia el electrodo de cargaopuesta (ánodo o cátodo) y este movimiento denominado electroforesis da nombre a la técnica.

3-MATERIALES Y METODOS
a) - Cromatografía:
-Papel de filtro
-Pipeta Pasteur de punta reducida
-Soluciones acuosas de aminoácidos 0,2% m/v de Tirosina (Tir), Acido Glutámico (Glu), Alanina (Ala) y una muestra problema que es mezcla dos de estos.
-Secador de cabello
-Cámara cromatográfica con lossiguientes solventes: n-butanol, ac. Acético glacial, agua (6:1:2)
-Revelador (200mg Ninhidrina en 100 ml de acetona)
-Guantes
-Lápiz
-Regla

Manipulando por los bordes, se trazó una línea de base o línea de siembra a 3cm de un extremo. Se dibujaron puntos de siembra en la línea base y en c/u de ellos con una pipeta Pasteur de punta reducida se colocó una gotita de cada solución de aminoácidoy de la muestra problema. Se empleó un secador de cabello para acelerar el secado de las siembras ya hechas y poder repetirlas. Esto se hizo 6 veces. La tira de papel se suspendió en la cámara cromatográfica, se tapó y dejó correr hasta que el frente alcanzó una altura de 5cm del borde superior del papel. Se sometió a secado con secador eléctrico y reveló vertiendo sobre el papel soluciónreveladora. Se secó.
b)-Electroforesis:
-Papel de filtro (16x6) cm
-Buffer de Piridina pH=6,1 (40 ml de Piridina con 3,2 ml de ac. acético glacial y agua hasta completar un litro)
-Cuba de Electroforesis
-Fuente 275V
-Soluciones de: Valina (Val), Acido Glutámico (Glu), Arginina (Arg) y una muestra problema que es mezcla de dos de estos.

Se sembró sobre el centro de un papel de filtro, teniendoen cuentas las mismas precauciones que en la cromatografía. En el margen derecho de la tira de papel se coloco el signo (+) para indicar el extremo del papel que se colocó en el compartimiento de la cubeta que actúa como ánodo. Se colocó la tira de papel en la cubeta de electroforesis y se la roció con el Buffer, procurando no mojar directamente la muestra pero asegurándose de que se cierre el...