Cromatografia

La Cromatografía en Fase Reversa.
Fundamentos.
La cromatografía en fase reversa (RPC) permite separar moléculas en base a su polaridad. El principio de la cromatografía en fase reversa es semejanteal de la cromatografía en capa fina. Sin embargo, aquí la fase estacionaria es de patículas de sílica químicamente modificadas con hidrocarburos saturados, insaturados o aromáticos de diferentestipos. Esto convierte a la fase estacionaria en una matríz apolar. Por lo tanto, para este tipo de cromatografías se emplean mezclas de solventes polares, tales como agua, acetonitrilo, acetato de etilo,acetona y alcoles alifáticos.
En virtud de lo anterior, este tipo de cromatografía ha sido también llamada como cromatografía de interacción hidrofóbica (HIC). En general, este  último término se haempleado para referirse a las aplicaciones en las que se emplean substituyentes y matrices compatibles con fluidos biológicos. Por tanto, el termino HIC es común cuando se habla de purificación deproteínas y carbohidratos, en tanto que RPC es más empleado para referirse a la separación de moléculas en sistemas que son inadecuados para la separación de macromoléculas biológicas.
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Lasmoléculas se retienen en la columna en virtud de las interacciones hidrofóbicas que establecen con la sílica modificada. Aunque, las interacciones hidrofóbicas son en general bastante débiles, son también amenudo muy numerosas y para eluír las moléculas es casi siempre necesario disminuir la polaridad del disolvente; para ello se puede substituir el agua de la fase móvil con un solvente orgánico cuyaconcentración se va aumentando gradualmente.
Debido a diversas limitaciones prácticas de la cromatografía de capa fina en fase reversa, entre las que destaca el costo de usar placas no reutilizables deuna matríz difícil de sintetizar, la cromatografía en fase reversa ha sido adaptada para el uso de columnas. La versatilidad y eficiencia  de este tipo de cromatografía se ha visto incrementada...