Cromatografia

PRÁCTICA # 6
“CROMATOGRAFÍA EN COLUMNA”
OBJETIVOS:
•
Conocer la cromatografía en columna como técnica de separación de mezclas de sustancias,
sus características y los factores que en ella intervienen.
•
Utilizar la cromatografía en columna para la purificación de una sustancia contaminada con un
colorante.
•
Controlar con cromatografía en capa fina el proceso de separación demezclas por cromatografía
en columna.
INTRODUCCIÓN:
Las técnicas cromatográficas se emplean para separar los componentes individuales de una mezcla y, en ciertos casos, para identificar un compuesto comparando su comportamiento cromatográfico con el de sustancias conocidas empleadas como patrón.
La base de la técnica es que cuando un determinado soluto interactúa con dos fases, una deellas, habitualmente sólida, llamada fase estacionaria, experimenta una serie de procesos (adsorción en fase sólida, solubilización en cada fase, arrastre por la fase móvil, etc.) que, en último extremo, llevan a que el soluto se reparta entre ambas fases. En el equilibrio, la relación entre las concentraciones del soluto entre ambas fases es constante, y se denomina coeficiente de reparto. Si en unamezcla, cada componente tiene un coeficiente de reparto diferente del de los otros, la separación será buena. Naturalmente, dicho coeficiente depende de la naturaleza de las fases, así como de las condiciones de la cromatografía.
Una de las técnicas cromatográficas más sencillas es la que se realiza en capa fina, llamada así porque la fase estacionaria es una capa fina de un material poroso(gel de sílice, alúmina, etc.) extendida para su manejo mecánico sobre un soporte inerte. La fase móvil es una mezcla de disolventes en diferentes proporciones, que emigra por la fase estacionaria debido, sobre todo, a la capilaridad. En su movimiento, arrastra más o menos a los componentes de una mezcla en función de sus mayores o menores coeficientes de reparto.
El coeficiente de reparto es pocoempleado en la práctica. En su lugar, y relacionado con él, se emplea el denominado Rf, característico de cada sustancia, definido como la relación entre la distancia que recorre dicha sustancia y la que recorre la fase móvil. Las más insolubles tendrán, en el disolvente empleado, un Rf próximo a cero, mientras las más solubles se acercarán a uno.
Cromatografía en columna:
Se emplea para laseparación de mezclas o purificación de sustancias a escala preparativa. Como fase estacionaria se usa, generalmente, gel de sílice o alúmina dentro de una columna. La elección del disolvente es crucial para una buena separación. Dicho disolvente pasa a través de la columna por efecto de la gravedad o bien por aplicación de presión (cromatografía flash). La columna se prepara mezclando el soportecon disolvente y se rellena la columna poniendo en el fondo de ésta un poco de algodón o lana de vidrio, para evitar que la sílica o la alúmina queden retenidas en la columna y que el disolvente se engrasada hasta el nivel del soporte. A continuación se introduce la muestra por la parte superior de la columna y se eluye con el disolvente elegido, recogiéndose por lo general en tubos de ensayo.
Unacolumna de cromatografía es un tubo de vidrio relleno con una sustancia sólida de propiedades
adsorbentes constituida por pequeñas partículas: gel de sílice y alúmina son las más usadas. Este relleno
es lo que se conoce en cromatografía como la fase estacionaria. A través de la columna se hará pasar
una corriente de un disolvente o mezcla de disolventes denominadaeluyente y/o fase móvil.La mezcla de compuestos a separar se disuelve en una pequeña cantidad de disolvente y se coloca sobre el adsorbente, en la parte superior de la columna, quedando adsorbida por el mismo. A continuación se pasa un flujo de eluyente a través de la columna. Los compuestos constituyentes de la mezcla son arrastrados por el eluyente a su paso, haciéndoles avanzar a lo largo de la columna. Sin...