Cromatografia

Trabajo Practico Nº 5: Cromatografía
en capa delgada y papel

Objetivos: Realizar las cromatografías de absorción y partición, en capa delgada y papel respectivamente, para familiarizarnos con el método y comparar las distintas eficacias.

Introducción teórica:

La cromatografía es un método físico-químico que permite separar, aislar, purificar o identificar los componentes o sustanciasintegrantes de una mezcla sembrada a la cual la remueve o no la fase móvil, según como sea la interacción. Se basa en el principio general de distribución de un compuesto entre dos fases, una fija y otra móvil.
Se la puede definir como la remoción selectiva de componentes de una muestra por la acción de la fase móvil que fluye a través de la fase estacionaria, donde se encuentra.
Clasificación:Según el fenómeno por el cual se produce, se puede clasificar en:
- Cromatografía de adsorción: la fase estacionaria es un sólido finamente pulverizado. Puede desarrollarse en columna o en placa. La separación se debe a las diferentes interacciones de superficie que se establecen entre los componentes de la mezcla y las partículas de adsorbente. El fenómeno de adsorción ocurre en lasuperficie del gránulo de fase fija, y se fundamenta en la atracción entre el soluto y el adsorbente por formación de uniones dipolo y puentes de hidrógeno.
- Cromatografía de partición o de reparto: La fase estacionaria es un líquido fuertemente retenido a un sólido o a una tira de papel. La fase estacionaria generalmente es el agua. Puede desarrollarse en columna o placa. La separación estábasada en los fenómenos de reparto o distribución de solutos por sus diferentes coeficientes de partición, entre dos fases líquidas inmiscibles o parcialmente inmiscibles entre sí.
Según la forma de realizar la cromatografía se clasifica en:
a) Cromatografía en columna clásica: La fase estacionaria se coloca en una columna tubular hueca provista de robinete. Puede utilizarse como fase estacionaria unsólido o un líquido retenido por un sólido (soporte).
b) Cromatografía plana: La fase estacionaria se coloca sobre una superficie plana (vidrio o aluminio) o bien puede utilizarse convenientemente una tira de papel de filtro.
La elección del disolvente es experimental, a menos que se conozca la polarizabilidad de los componentes de la muestra o por reactividad del mismo con algún grupofuncional.
La movilidad del soluto depende principalmente de su polaridad relativa, de la temperatura del sistema, la saturación de la cuba y de los solventes utilizados.
El Rf (relación de frente) se lo utiliza para medir el desplazamiento relativo alcanzado por la muestra y se lo define como el cociente entre la distancia recorrida por el compuesto y la distancia recorrida por el solvente dedesarrollo.
Si la sustancia incógnita y el patrón con que se la compara en la misma corrida cromatográfica dan valores de Rf distintos no se trata del mismo compuesto. (A la inversa si da un mismo valor de Rf no se puede asegurar que sean idénticas).

Desarrollo:

Materiales:
Cuba de vidrio de fondo plano: las placas se acomodaron en estas cubas, en cuyas paredes se había clocado un papel defiltro empapado en el disolvente que cubría el fondo de dicha cuba.
Vaso de precipitado: al igual que la cuba, se utilizaron los vasos de precipitado para realizar otras 2 cromatografías y comparar los resultados.
Vidrio de reloj: Una vez colocadas las placas en los vasos de precipitado, se utilizaron los vidrios de reloj para cubrirlos y evitar que se escapen los vapores del disolvente.
Soporte:Placa de aluminio de 10 x 6,5cm. Placa de vidrio de 10 x 20cm.
Capilares: se utilizan para realizar la siembra en la placa.
Adsorbente: Silica gel 606 (Merk): Por el momento, el adsorbente más utilizado. La gel de sílice separa bien aldehídos y cetonas, alcaloides, azúcares, fenoles, esteroides, terpenoides, ácidos grasos y aminoácidos.
Fase móvil: solución de n-butanol, ácido acético y agua...