Cromatografia

SEPARACIÓN DE PROTEÍNAS POR CROMATOGRAFÍA DE EXCLUSIÓN MOLECULAR INTRODUCCION La cromatografía es una técnica que permite la separación de moléculas diferentes presentes en una misma muestra. Elmétodo está basado en la circulación de una fase móvil (que arrastra a la mezcla de compuestos a separar), a través de una fase estacionaria. Dependiendo de la afinidad relativa que por ambas fases tenganlos distintos compuestos presentes en la mezcla resultará su separación. La cromatografía de exclusión molecular (a menudo también llamada filtración en gel o de tamiz molecular) es una de lastécnicas más sencillas de las empleadas en la separación de proteínas y ácidos nucleicos. Este tipo de cromatografía se realiza en columnas cilíndricas rellenas con algunos de los geles que se fabrican coneste fín y que pueden ser de varios tipos: dextranos con enlaces cruzados (sephadex), agarosa (sepharose, Bio-gel A), poliacrilamida (Bio-gel B), etc. Todos estos geles (fase estacionaria) se hallanconstituidos por gránulos (particulas) de un material esponjoso hidratado, que contiene poros con un tamaño de diámetro determinado.

Hypothetical partial structure of sephacryl Cuando se hace pasaruna mezcla de moléculas de distinto tamaño, a través de una columna de filtración en gel; aquellas moléculas con un tamaño mayor que el diámetro de los poros de las particulas, sólo podran moverse en sucamino, a través de la fase estacionaria, en el espacio que queda entre las partículas; y por lo tanto, no se verán retrasadas en su descenso. En cambio aquellas moléculas capaces de penetrar en laspartículas se verán retrasadas por la fase estacionaria; en mayor medida, cuanto menor sea su tamaño. Por lo tanto, las moléculas eluyen en este tipo de cromatografía por orden decreciente de tamañomolecular.

Mecanismo de la cromatografía de exclusión

Las mallas del gel permiten la entrada selectiva de las particulas de menor masa molecular. De ahí que las particulas de mayor peso...