cromatografia

SEPARACIÓN DE PROTEÍNAS POR CROMATOGRAFÍA DE
EXCLUSIÓN MOLECULAR
INTRODUCCION
La cromatografía es una técnica que permite la separación de
moléculas diferentes presentes en una misma muestra. Elmétodo está
basado en la circulación de una fase móvil (que arrastra a la mezcla de
compuestos a separar), a través de una fase estacionaria. Dependiendo de la
afinidad relativa que por ambas fasestengan los distintos compuestos
presentes en la mezcla resultará su separación.
La cromatografía de exclusión molecular (a menudo también llamada
filtración en gel o de tamiz molecular) es una delas técnicas más sencillas
de las empleadas en la separación de proteínas y ácidos nucleicos. Este tipo
de cromatografía se realiza en columnas cilíndricas rellenas con algunos de
los geles que sefabrican con este fín y que pueden ser de varios tipos:
dextranos con enlaces cruzados (sephadex), agarosa (sepharose, Bio-gel A),
poliacrilamida (Bio-gel B), etc. Todos estos geles (faseestacionaria) se
hallan constituidos por gránulos (particulas) de un material esponjoso
hidratado, que contiene poros con un tamaño de diámetro determinado.

Hypothetical partial structure of sephacrylCuando se hace pasar una mezcla de moléculas de distinto tamaño, a
través de una columna de filtración en gel; aquellas moléculas con un
tamaño mayor que el diámetro de los poros de las particulas,sólo podran
moverse en su camino, a través de la fase estacionaria, en el espacio que
queda entre las partículas; y por lo tanto, no se verán retrasadas en su
descenso. En cambio aquellas moléculascapaces de penetrar en las
partículas se verán retrasadas por la fase estacionaria; en mayor medida,
cuanto menor sea su tamaño. Por lo tanto, las moléculas eluyen en este tipo
de cromatografía pororden decreciente de tamaño molecular.

Mecanismo de la cromatografía de exclusión

Las mallas del gel permiten la entrada selectiva de las particulas de menor
masa molecular. De ahí que las...