Cromatografia

SEPARACION E IDENTIFICACION DE AMINOACIDOS DE JUGOS DE FRUTOS POR CROMATOGRAFIA BIDIMENSIONAL EN CAPA FINA.

OBJETIVOS:
El alumno:
* Separara los aminoácidos presentes en jugo de frutos por cromatografía bidimensional en capa fina.
* Identificara los aminoácidos separados por comparación de sus valores de Rf con los de soluciones tipo de aminoácidos.
* Comparara el grado deresolución de la cromatografía bidimensional, con el de la unidimensional.
INTRODUCCION
La cromatografía es un método muy utilizado en todas las ramas de la ciencia y que permite la separación, identificación y determinación de los componentes químicos en mezclas complejas.
En todas las separaciones cromatografícas, la muestra se desplaza con una fase móvil, que puede ser un gas, un líquido o unfluido supercrítico. Esta fase móvil se hace pasar a través de una fase estacionaria con la que es inmiscible, y que se fija a una columna o a una superficie sólida. Las dos fases se eligen detal forma, que los componentes de la muestra se distribuyen de modo distinto entre la fase móvil y la fase estacionaria. Aquellos componentes que son fuertemente retenidos por la fase estacionaria se muevenlentamente con el flujo de la fase móvil; por el contrario, los componentes que se unen débilmente a la fase estacionaria, se mueven con rapidez. Como consecuencia de la distinta movilidad, los componentes de la muestra se separan en bandas o zonas discretas que pueden analizarse cualitativa y/o cuantitativamente.

Los métodos de cromatografía plana incluyen la cromatografía en capa fina
(TLC) y la cromatografía en papel (PC). En todos los casos se emplea una capa plana y relativamente delgada de un material que a su vez es el soporte, o bien que recubre una superficie de vidrio, plástico o metálica. La fase móvil se mueve a través de la estacionaria por capilaridad, a veces ayudada por gravedad o por aplicación de un potencial eléctrico. 
Las separaciones en capa fina se realizan en placasde vidrio o plástico que se recubren con una capa delgada y adherente de partículas finamente dividas; esta es la capa estacionaria.
La aplicación de la muestra es el aspecto mas critico de la cromatografía en capa fina. Por lo general, se aplica una disolución de la muestra del 0,001 al 0,1 %, como una mancha, a 1 o 2 cm. del extremo dela placa. Pero para una separación de mayor eficacia, lamancha debería tener un diámetro mínimo-aproximadamente 5nm para una aplicación cualitativa y menor para el análisis cuantitativo, y en el caso de las disoluciones diluidas se realiza tres o cuatro aplicaciones superpuestas secando la zona entre aplicación. La aplicación puede ser manual o por aplicadores mecánicos. Si es manual es por contacto entre la placa y un capilar que contiene la muestra, outilizando una jeringa hipodérmica.
CROMATOGRAFÍA EN PLANO BIDIMENSIONAL

En este caso la muestra se coloca en una de las esquinas de una placa cuadrada y se realiza el desarrollo en dirección ascendente con el disolvente A. A continuación se elimina este disolvente por evaporación, y se gira la placa 90 grados, realizando ahora el desarrollo ascendente con el disolvente B. Tras la eliminacióndel disolvente, se determina la posición de los componentes con un reactivo de revelado, tipo ninhidrina, y las manchas originadas se identifican comparando sus posiciones con las de los estándares
En cuanto al análisis cuantitativo, éste se puede hacer comparando el área de la mancha del estándar con la del analito, se puede hacer una estimación semicuantitativa de la cantidad delcomponente presente. Los mejores resultados se obtienen si se raspa la mancha de la placa, se extrae el analito del sólido que forma la fase estacionaria, y se determina el analito por métodos físico o químicos. Otro procedimiento consiste en usar un densitómetro de barrido que puede medir la radiación emitida de la mancha por fluorescencia o reflexión.
RESULTADOS EXPERIMENTALES.

DATOS EXPERIMENTALES...