Cromatografia

CROMATOGRAFIA
La cromatografía se define como la separación de una mezcla de dos o más compuestos por distribución entre dos fases, una de las cuales es estacionaria y la otra una fase móvil. Varios tipos de cromatografía son posibles, dependiendo de la naturaleza de las dos fases involucradas: sólido-liquido (capa fina, papel o columna), liquido-liquido y gases-liquido (fase vapor).Todas las técnicas cromatográficas dependen de la distribución de los componentes de la mezcla entre dos fases inmiscibles: una fase móvil, llamada también activa, que transporta las sustancias que se separan y que progresa en relación con la otra, denominada fase estacionaria. La fase móvil puede ser un líquido o un gas y la estacionaria puede ser un sólido o un líquido.
Todoslos sólidos finamente pulverizados tienen el poder de adsorber en mayor o menor grado otras sustancias sobre su superficie; y, similarmente, todas las sustancias pueden ser adsorbidas, unas con más facilidad que otras. Este fenómeno de adsorción selectiva es el principio fundamental de la cromatografía.
CONCEPTO DE R.F.
Rf es el registro y se define como la distancia que recorrela muestra desde el punto de aplicación / distancia que recorre el disolvente hasta el frente del eluyente
El valor de Rf depende de las condiciones en las cuales se corre la muestra (tipo de adsorbente, eluyente, así como las condiciones de la placa, temperatura, vapor de saturación, etc.). Tiene una reproducibilidad de ± 20%, por lo que es mejor correrduplicados de la misma placa.
CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA.

En este caso se utiliza una placa recubierta con fase estacionaria manteniendo un pequeño espesor constante a lo largo de la placa. El eluyente ascenderá, por capilaridad, por la placa y arrastrará los componentes a lo largo de ésta produciendo “manchas” de los componentes. Se usan láminas de: vidrio comosoporte del adsorbente, plástico (ej: acetato) ó metálicos (ej: aluminio). Los tamaños de la placa para CCf convencional son: 20 x 20; 10 x 20 y 5 x 2. Hay placas que contienen un indicador de fluorescencia, para facilitar la identificación de las muestras. Si no se usa indicador y los componentes no son coloridos se requerirán técnicas de revelado. Los reveladores más comunesson:
• Luz UV: si la sustancia absorbe luz ultravioleta, se puede usar una fase estacionaria impregnada con un indicador fluorescente (F254 ó F366), el número que aparece como subíndice nos indica la longitud de onda de excitación del indicador utilizado.
• La introducción de la placa en vapores de yodo.
• El rocío con una solución de agua/H₂SO₄1:1 (dentro de un compartimiento especialmente protegido y bajo una campana de extracción de gases).
• Después calentar intensamente, por ejemplo, con un mechero hasta carbonizar los compuestos.
ELUYENTES Y ADSORVENTES MÁS COMUNES PARA CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA.
ADSORVENTES
a) Silica gel (se utiliza en el 80% de las separaciones)
b) Óxido de Aluminio ó Alúmina (ácida,neutra ó básica)
c) Celulosa (Nativa o micro-cristalina)
d) Poliamidas
Para la selección del adsorbente debe tomar las siguientes consideraciones: Polaridad, Tamaño de partícula, Diámetro, Área Superficial, Homogeneidad, Pureza.
ELUYENTES
Éter de petróleo, tolueno, dietil-éter, t-butil-éter, diclorometano, acetato de etilo,n-pentano, n-hexano, ciclohexano, tetracloruro decarbono, éter dietílico, cloroformo, acetona, iso-propanol, etanol, metanol, ácido acético.
FACTORES QUE INFLUYEN EN UNA SEPARACIÓN POR CROMATOGRAFÍA DE CAPA FINA.
a) Temperatura: a menor temperatura las sustancias se adsorben más en la fase estacionaria.
b) La cromatografía debe llevarse a cabo en un área sin corrientes de aire.
c) Limpieza de las placas. Muchas placas están...