Cromatografia

CROMATOGRAFIA DE EXCLUSION MOLECULAR:
También llamada cromatografía de filtración por gel.
* Separa las moléculas por su tamaño. Las moléculas de mayor tamaño pasan mas rápidamente que las de menor tamaño.
* No hay interacción atractiva entre la fase estacionaria y el soluto.
* En su lugar la fase móvil liquida o gaseosa pasa a través de un gel poroso.
* Los poros son bastantespequeños para excluir a los solutos grandes, pero no a los pequeños.
* Las moléculas grandes pasan de largo sin entrar a los poros.
* Las moléculas pequeñas tardan más tiempo en pasar a través de la columna porque penetran dentro del gel.

Este tipo de cromatografía se realiza en columnas cilíndricas rellenas con algunos de los geles que se fabrican con este fín y que pueden serde varios tipos: dextranos con enlaces cruzados (sephadex), agarosa (sepharose, Bio-gel A), poliacrilamida (Bio-gel B), etc.
Todos estos geles (fase estacionaria) se hallan constituidos por gránulos (partículas) de un material esponjoso hidratado, que contiene poros con un tamaño de diámetro determinado. Cuando se hace pasar una mezcla de moléculas de distinto tamaño, a través deuna columna de filtración en gel; aquellas moléculas con un tamaño mayor que el diámetro de los poros de las partículas, sólo podrán moverse en su camino, a través de la fase estacionaria, en el espacio que queda entre las partículas; y por lo tanto, no se verán retrasadas en su descenso. En cambio aquellas moléculas capaces de penetrar en las partículas severán retrasadas por la fase estacionaria; en mayor medida, cuanto menor sea su tamaño. Por lo tanto, las moléculas eluyen en este tipo de cromatografía por orden decreciente de tamaño molecular.
Las mallas del gel permiten la entrada selectiva de las partículas de menor masa molecular. De ahí que las partículas de mayor peso molecular salgan primero.
APLICACIONES A)Cambios de buffers. Después de cromatografías de intercambio iónico, afinidad o de interacción hidrofóbica. B) Desalado. Proteínas, polisacáridos, polipéptidos etc. Pueden ser desalados antes de ser concentrados o liofilizados. C) Eliminación de fenol de las preparaciones de ácidos nucléicos. D) Eliminación de compuestos de bajo peso molecular marcados. I125, FITC de las soluciones demarcaje de proteínas.
E) Para reacciones entre macromoléculas y reactivos de bajo peso molecular. F) Eliminación de productos, cofactores, inhibidores, etc. De las enzimas. G) Purificación de macromoléculas. H) Determinación del peso molecular de las proteínas.

COMATROGRAFIA DE EXCLUSION MOLECULAR
La purificación de una sustancia de interés se hace siguiendo los criterios de separación basadosen alguna propiedad física o química que diferencia al compuesto en cuestión de otros que en principio estarían ligados a él.
La cromatografía de filtración en gel, más corrientemente llamada de exclusión molecular, es una técnica de purificación muy extendida y apreciada debido a su sencillez y eficacia en la resolución de mezclas complejas de macromoléculas. Esta técnica puede utilizarse conbuenos resultados con fines analíticos (por ejemplo, para la determinación de pesos moleculares).
Se definen los siguientes parámetros:
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Intervalo de fraccionamiento de un determinado tipo de gel, como los valores extremos (Máximo y mínimo) de pesos moleculares entre los cuales el gel tiene capacidad de separar.
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Volumen de elución, es el volumen necesario para eluir un compuesto de unacolumna.
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Volumen de exclusión de la columna al volumen al que eluyen las moléculas de tamaño superior al intervalo de fraccionamiento del gel. Corresponde a la suma del volumen de los huecos entre las partículas de gel.
Principio.Con la cromatografía de filtración en gel se separan moléculas en virtud de sus
diferencias de tamaño. La capacidad separadora reside en el gel cuya matriz...