cromatografia

Cromatografía.

INTRODUCCIÓN
La cromatografía se define como la separación de una mezcla de dos o más compuestos por distribución entre dos fases, una de las cuales es estacionaria y la otra una fase móvil. Varios tipos de cromatografía son posibles, dependiendo de la naturaleza de las dos fases involucradas: sólido-liquido (capa fina, papel o columna), liquido-líquido y gases-liquido (fasevapor). Todas las técnicas cromatográficas dependen de la distribución de los componentes de la mezcla entre dos fases inmiscibles: una fase móvil, llamada también activa, que transporta las sustancias que se separan y que progresa en relación con la otra, denominada fase estacionaria. La fase móvil puede ser un líquido o un gas y la estacionaria puede ser un sólido o un líquido.
Todos los sólidosfinalmente pulverizados tienen el poder de absorber en mayor o en menor grado otras sustancias sobre su superficie; y, similarmente' todas las sustancias pueden ser adsorbidas, unas con más facilidad que otras. Este fenómeno de adsorción selectiva es el principio fundamental de la cromatografía.
El estudio y caracterización de las distintas biomoléculas (azúcares, lípidos, proteínas, ácidosnucleicos, etc.) requiere en numerosos casos su aislamiento y purificación a partir de mezclas complejas como son los preparados de cualquier material biológico. Una de las técnicas bioquímicas más clásicas y utilizadas para dicho fin es la cromatografía. La cromatografía incluye una amplia gama de técnicas, que se pueden clasificar atendiendo al fundamento físico-químico en el que se basa laseparación (cromatografía de adsorción, de reparto, de cambio iónico, de filtración molecular, hidrofóbica y de afinidad), o al material sobre el que se lleva a cabo (cromatografía en papel, capa fina, en columna y de gases).1

MARCO TEÓRICO
Cromatografía de papel
Es la más sencilla de las técnicas, pero sólo nos dará resultados cualitativos. Está casi en desuso. El método se basa en unmecanismo de reparto, y consiste en depositar una pequeña cantidad de muestra en el extremo de una tira de papel de filtro, que se deja evaporar. Luego se introduce la tira en una cubeta que contenga el disolvente, de manera que éste fluya por la tira por capilaridad
Cuando el disolvente deja de ascender o ha llegado al extremo, se retira el papel y seca. Si el disolvente elegido fue adecuado y lassustancias tienen color propio se verán las manchas de distinto color separadas. Cuando los componentes no tienen color propio el papel se somete a procesos de revelado. Hay varios factores de los cuales depende una cromatografía eficaz: la elección del disolvente y la del papel de filtro.2



Cromatografía en capa fina
En este caso se utiliza una placa recubierta con fase estacionariamanteniendo un pequeño espesor constante a lo largo de la placa. El eluyente ascenderá, por capilaridad, por la placa y arrastrará los componentes a lo largo de ésta produciendo "manchas" de los componentes. En la cromatografía en capa fina (ccf), el grado de elución de las sustancias depende tanto de su propia polaridad como de la polaridad del eluyente utilizado' El adsorbente se coloca en forma de unacapa delgada adherida sobre un soporte rígido, qué pueden ser placas de vidrio, aluminio o poliéster. Los tamaños de la placa para ccf convencional son: 20 x 20; 't0 x20 y 5x2 cm.
Hay adsorbentes que contienen un indicador de fluorescencia para facilitar la identificación de muestras. Si no se usa indicador y los componentes no son coloridos, se requerirán otras técnicas de revelado.
Eluyentesmás comunes para cromatografía en capa fina:
- éter de petróleo
- cloruro de metileno
- n-hexano
- acetato de etilo
- ciclo hexano
- acetona
- iso-propanol
- dietil-éter
- etanol
- f-butil-éter
- metanol
- cloroformo
- ácido acético
Reveladores más comunes para cromatografía en capa fina:
Las manchas de color son, por supuesto, inmediatamente visibles; las incoloras pueden...