Cromatografia

Practica 4 “Identifica los aminoácidos por cromatografía en papel.”

Propósito de la práctica: Identificar los aminoácidos de una muestra biológica por medio de cromatografía en papel para sucuantificación química.

Materiales y reactivos.
• Cámara cromatográfica
• Capilares
• Papel filtro (14 cm de ancho)
• Piseta
• Guantes de plástico
• Tijeras
• Regla
• Estufa
• Leucina,glicina, lisina y prolina (1mg/ml) (patrones)
• solución n-butanol / ácido acético/ H2O en relación 3:1:1 (fase móvil).
• Ninhidrina 0,2 % en etanol.
• Muestras problema.


Procedimiento:• Coloca con anticipación la fase móvil en la cámara cromatográfica y tápala, de modo que se sature con los vapores de esta fase.
• Toma el papel de un borde (superior) ocupando guantes de goma paraevitar contaminarlo con aminoácidos o proteínas que se encuentren en las manos.
• Corta el papel filtro como un rectángulo de 30 cm de alto y 14 cm de ancho. Marca con lápiz de grafito una línea a loancho del papel a 1,5 cm del borde inferior. Marca puntos en esta línea separados por una distancia de 1,5 a 2,0 cm entre sí.
• Coloca con un capilar fino, diferente para cada muestra, lassoluciones de los aminoácidos patrones y las muestras problemas sobre la línea marcada. Identifica siempre con lápiz grafito cada aplicación.
• Engancha la tira de papel filtro en la parte superior de lacámara cromatográfica que se encuentra saturada con los vapores de la fase móvil. Deja el borde inferior del papel sumergido 1,0 cm en la fase móvil.
• Deja que la fase móvil ascienda unos 15 cmaproximadamente, no permita que el líquido sobrepase el borde superior y saque el papel de la cámara.
• Deja secar a temperatura ambiente.
• Revela la cromatografía rociando el papel con ninhidrina yseca el cromatograma en una estufa de 80 a 90ºC.

Nota: Los aminoácidos aparecen como manchas púrpuras y amarillas.
• Marca el centro de las manchas de los aminoácidos, mida el avance de cada...