Cromatografia

1 FUNDAMENTOS DE CROMATOGRAFÍA
Objetivos

* Dar a conocer los fundamentos de las separaciones cromatografícas. * Dar a conocer los fundamentos para poder llevar a cabo las cromatografías de separación. * Poder realizar la elección de las condiciones óptimas de separación en función de la polaridad

y otras propiedades fisicoquímicas de los analitos.
Bibliografía

Ll. R. Snyder, J.L. Glajchy J.J. Kirkland, Practical HPLC Method Development, John Wiley & Sons, New York, 2a Ed. 1997 A. Braithwaite y F.J. Smith, Chromatographic Methods, Blackie Academic & Professional, 5a Ed., Glasgow, 1996 P. A. Sewell y B. Clarke, Chromatographic Separations, Analytical Chemistry by Open Learning, John Wiley & Sons, Chichester, 1987 K.A. Rubinson y J.F. Rubinson, Análisis Instrumental, PrenticeHall, Madrid, 2001 D.A. Skoog y J.J. Leary, Análisis Instrumental, McGraw-Hill, 4a Ed., Madrid, 1994

1.1.

Introducción

La primera persona que utilizo el tema de la cromatografía fue el ruso Tswett (1872-1919). Este químico utilizó la palabra cromatografía para explicar la separación de los distintos pigmentos de las plantas por medio de una tiza. De todas formas, la cromatografía no seutilizó hasta la década de 1930, concretamente cuando se empezó a extender la utilización de la capa fina y el intercambio de iones.

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1.1. INTRODUCCIÓN

La cromatografía, en general, recoge un amplio grupo de métodos físicos. A diferencia del resto de métodos de separación, las dos fases que se utilizan para la separación de los componentes tienen una característica común: una es estacionaria yla otra móvil. Por un lado, la fase estacionaria puede estar empaquetada en una columna o extendida en una capa plana o repartida en una capa fina. Debido a eso, en cualquier caso, a la fase estacionaria se le denomina lecho cromatográfico. Por otra parte, la fase móvil puede ser un líquido, un gas o un fluido supercrítico. Por medio de la combinación entre las dos fases se puede llevar a cabo unaprimera clasificación de las cromatografías de separación tal y como se recoge en la tabla 1.1.

Cuadro 1.1: Clasificación de las cromatografías en función de las características de las fases estacionaria y móvil. Fase Móvil
Gas Líquido Fluido Supercrítico

Fase estacionaria
Sólido Líquido Sólido Líquido Sólido

Nombre
Cromatografía Gas-Sólido Cromatografía Gas-Líquido CromatografíaLíquido-Sólido Cromatografía Líquido-Líquido Cromatografía de Fluidos Supercríticos

Tal y como se muestra en la Figura ?? la fase estacionaria puede tener distintas formas y en función de esas formas se puede llevar a cabo una subclasificación. Por ejemplo, si la fase estacionaria está extendida en una capa plana sobre una superficie de aluminio, vidrio o plástico entonces se denomina cromatografía de capafina1 o cromatografía plana; si se trata de una capa sobre un papel seria una cromatografía de papel2 y, por último, si el lecho cromatográfico rellena una columna de vidrio o un tubo metálico se hablaría de una cromatografía en columna3 . Cuando se dice que la fase estacionaria es un líquido, es preciso comprender que lo que realmente se tiene es un líquido adherido a un soporte sólido que quedaimpregnado gracias al flujo del liquido. Esa adhesión se lleva a cabo sobre la superficie sólida a través de distintos enlaces químicos. Mientras que la cromatografía de gases solo se puede llevar a cabo en columnas, la cromatografía liquida se puede llevar a cabo tanto en columnas como en capa plana. La cromatografía líquida clásica se llevaba a cabo en columnas de amplio diámetro interno ( 1-2 cm) yhoy en día también se puede seguir utilizando en cromatografías de preparación. En cambio, las croma1 tlc 2 pc

= thin layer chromatography = paper chromatography 3 cc = column chromatography

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1.1. INTRODUCCIÓN

tografías analíticas de hoy en día, como la cromatografía de alta resolución o HPLC4 utilizan columnas estrechas ( = 4,6 mm) y el flujo de la fase móvil es de 1-5 cm3 /...