cromatografia
Páginas: 5 (1216 palabras)
Publicado: 11 de noviembre de 2014
CROMATOGRAFIA EN CAPA FINA
EVALUACION DE FLAVONIDES
Objetivos:
Obtener una muestra más pura.
Determinar el factor RF.
Determinar la presencia de flavonoides en la muestra de la madera Shihuahuaco y también otros metabolitos secundarios que contiene la muestra.
Cromatografía de Capa Fina (CCF)
Es una técnica muy utilizada para la identificación y determinación de pureza decompuestos. También puede utilizarse como técnica de separación (cromatografía de capa fina TLC preparativa) a muy pequeña escala. En esta técnica la fase estacionaria es una capa fina de gel de sílice u otro soporte con propiedades adsorbentes (en nuestro caso de 25 mm de espesor) dispuesta sobre un soporte de vidrio o aluminio que denominaremos placa.
La separación de mezclas de moléculas mediantela cromatografía de capa fina se basa en el principio del reparto entre dos fases. Al igual que otras cromatografías, consiste de una fase estacionaria y una fase móvil y el principio es el mismo: la sustancia de interés se adherirá a la fase estacionaria o se moverá con la fase móvil, viajando una distancia que es inversamente proporcional a la afinidad por la fase estacionaria. La faseestacionaria puede ser variada. Puede ser de papel, de celulosa o de un gel de silicato (vidrio molido bien fino) unido a una superficie sólida (una placa de vidrio, aluminio, plástico o papel). Esta superficie sólida puede ser rígida o flexible. El tipo de fase estacionaria que se utilice en un experimento dependerá del tipo de moléculas que se quieran separar. Incluso vienen algunas placas conindicadores fluorescentes. La fase estacionaria consiste de un solvente que puede ser agua, un solvente orgánico o una mezcla de ambos.
Materiales:
1. Jeringa de 5 ml
2. Filtro jeringa
3. Papel filtro
4. Placa aluminio
5. Secadora
6. Silicagel 60
7. Luz UV
Procedimiento:
Primero se tiene el extracto filtrado sin residuos solidos para purificarlo posteriormente.
Luego se hace elSembrado, esto consiste en que la solución se va poniendo en la placa a 0.5 mm del borde en uno de los extremos de la placa, se seca con una secadora y se añade mas gotas en la línea marcada hasta completar la línea determinada, esto se repite hasta terminar con la cantidad indicada, por ejemplo 10 mm.
El proceso de secar nos refiere a que el solvente se ira evaporando y quedará la muestra masconcentrada y por tal de un color mas oscuro, en el caso si el extracto es de un color intenso.
Al terminar se deja secar por unos minutos y se coloca la placa en un envase (tanque de desarrollo) que ya contiene una pequeña cantidad del solvente (BAW- Butanol, Ac. Acético, Agua); luego se deja correr por un rato.
El solvente subirá por capilaridad e irá arrastrando las moléculas, las cualesse moverán según la afinidad que muestren por la fase estacionaria.
Al observar que el solvente ha llegado a la línea superior de la placa, entonces se retira ésta y se deja secar por unos minutos para luego analizarlo con luz ultra violeta y así determinar cuales son los compuestos obtenidos al purificar, mediante los colores manifestados bajo la luz de onda corta y luz de onda larga.
Lasplacas de cromatografía comerciales portan un agente fluorescente inorgánico en la fase estacionaria. Ello permite visualizar el cromatograma iluminando la placa con una lámpara de luz ultravioleta UV y se aprecian los diferentes compuestos en la placa como manchas circulares.
Luego de reconocer las manchas de colores y limitarlas con un lápiz para el posterior estudio, se procede a calcularel factor Rf que viene a ser el cociente de la distancia recorrida por el compuesto (dc) entre la distancia recorrida por el eluyente (de). El R f toma valores entre 0.0 y 1.0.
Con estos resultados se determinará cuales son los metabolitos secundarios que conforma la muestra.
Resultados:
Datos de cromatografía en capa fina con extracto de Shihuahuaco...
EVALUACION DE FLAVONIDES
Objetivos:
Obtener una muestra más pura.
Determinar el factor RF.
Determinar la presencia de flavonoides en la muestra de la madera Shihuahuaco y también otros metabolitos secundarios que contiene la muestra.
Cromatografía de Capa Fina (CCF)
Es una técnica muy utilizada para la identificación y determinación de pureza decompuestos. También puede utilizarse como técnica de separación (cromatografía de capa fina TLC preparativa) a muy pequeña escala. En esta técnica la fase estacionaria es una capa fina de gel de sílice u otro soporte con propiedades adsorbentes (en nuestro caso de 25 mm de espesor) dispuesta sobre un soporte de vidrio o aluminio que denominaremos placa.
La separación de mezclas de moléculas mediantela cromatografía de capa fina se basa en el principio del reparto entre dos fases. Al igual que otras cromatografías, consiste de una fase estacionaria y una fase móvil y el principio es el mismo: la sustancia de interés se adherirá a la fase estacionaria o se moverá con la fase móvil, viajando una distancia que es inversamente proporcional a la afinidad por la fase estacionaria. La faseestacionaria puede ser variada. Puede ser de papel, de celulosa o de un gel de silicato (vidrio molido bien fino) unido a una superficie sólida (una placa de vidrio, aluminio, plástico o papel). Esta superficie sólida puede ser rígida o flexible. El tipo de fase estacionaria que se utilice en un experimento dependerá del tipo de moléculas que se quieran separar. Incluso vienen algunas placas conindicadores fluorescentes. La fase estacionaria consiste de un solvente que puede ser agua, un solvente orgánico o una mezcla de ambos.
Materiales:
1. Jeringa de 5 ml
2. Filtro jeringa
3. Papel filtro
4. Placa aluminio
5. Secadora
6. Silicagel 60
7. Luz UV
Procedimiento:
Primero se tiene el extracto filtrado sin residuos solidos para purificarlo posteriormente.
Luego se hace elSembrado, esto consiste en que la solución se va poniendo en la placa a 0.5 mm del borde en uno de los extremos de la placa, se seca con una secadora y se añade mas gotas en la línea marcada hasta completar la línea determinada, esto se repite hasta terminar con la cantidad indicada, por ejemplo 10 mm.
El proceso de secar nos refiere a que el solvente se ira evaporando y quedará la muestra masconcentrada y por tal de un color mas oscuro, en el caso si el extracto es de un color intenso.
Al terminar se deja secar por unos minutos y se coloca la placa en un envase (tanque de desarrollo) que ya contiene una pequeña cantidad del solvente (BAW- Butanol, Ac. Acético, Agua); luego se deja correr por un rato.
El solvente subirá por capilaridad e irá arrastrando las moléculas, las cualesse moverán según la afinidad que muestren por la fase estacionaria.
Al observar que el solvente ha llegado a la línea superior de la placa, entonces se retira ésta y se deja secar por unos minutos para luego analizarlo con luz ultra violeta y así determinar cuales son los compuestos obtenidos al purificar, mediante los colores manifestados bajo la luz de onda corta y luz de onda larga.
Lasplacas de cromatografía comerciales portan un agente fluorescente inorgánico en la fase estacionaria. Ello permite visualizar el cromatograma iluminando la placa con una lámpara de luz ultravioleta UV y se aprecian los diferentes compuestos en la placa como manchas circulares.
Luego de reconocer las manchas de colores y limitarlas con un lápiz para el posterior estudio, se procede a calcularel factor Rf que viene a ser el cociente de la distancia recorrida por el compuesto (dc) entre la distancia recorrida por el eluyente (de). El R f toma valores entre 0.0 y 1.0.
Con estos resultados se determinará cuales son los metabolitos secundarios que conforma la muestra.
Resultados:
Datos de cromatografía en capa fina con extracto de Shihuahuaco...
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