Cromatografia

Introducción
Los métodos para la determinación de las diferentes moléculas biológicas se basan en las características diferenciales de las moléculas que pueden hallarse en los seres vivos. Lasdiferencias de estas moléculas se encuentran en sus propiedades químicas, físicas y bioquímicas, por lo que los métodos y técnicas que se han ido desarrollando se fundamentan en estas propiedades. Unmétodo útil para el aislamiento de organelos es el fraccionamiento celular cuyo objetivo es aislar y separar los principales organelos de las células.
El fraccionamiento celular requiere la ruptura delas células en condiciones en las que no se destruyan los organelos celulares, para esto se lleva a cabo una homogeneización del tejido. En este proceso pueden utilizarse diferentes medios mecánicos.Para los tejidos animales se utiliza un homogeneizador denominado “Potter” (que consiste en un tubo de vidrio con un dispositivo esmerilado rotatorio). Este método es muy suave y por eso seutiliza para el aislamiento de estructuras y moléculas lábiles. Otros métodos usados para el rompimiento de las células son la lisis enzimática de la pared celular o el rompimiento mecánico mediante el usodel mortero. También se puede utilizar el corte de los tejidos con cuchillas giratorias (Virtis) y los cambios de presión por choque osmótico o bien por medio de métodos físicos.
Para obtenerorganelos celulares intactos el fraccionamiento celular debe ser isotónico, es decir, que la presión osmótica o tonicidad del amortiguador debe corresponder a la del interior de la célula. En lassoluciones hipotónicas los organelos estallarían al captar agua, en tanto que en las hipertónicas se encogerían.
La separación propiamente dicha de los componentes celulares se inicia con lacentrifugación, cuya velocidad se expresa en múltiplos de la aceleración gravitatoria de la Tierra g=9.81 m/s2. La centrifugación es el proceso más utilizado para separar un homogenizado en diferentes partes o...